การประชุมวิชาการเรื่อง Analytical Method Validation for FDA Compliance

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 1
ÊÁÒ¤ÁàÀ滄 ¡Ã굯 ÊÒË¡Òà (»ÃÐà·Èä·Â)
TIPA | Thai Industrial Pharmacist
Association
¡ÒûÃЪÁØ ÇªÔ Ò¡ÒäçÑ้ ·Õ่ 4/2562

12-13 ¾ÄȨ¡Ô Ò¹ 2562
âçáÃÁáÍÁºÒÊ«Òà´ÍÏ 梯 ÁØ Ç·Ô 11 ¡Ã§Ø à·¾Ï

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562



สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 1

ÊÁÒ¤ÁàÀ滄 ¡Ã굯 ÊÒË¡Òà (»ÃÐà·Èä·Â) 1
2
TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association 3
5
สารบญั
8
สารบญั
การประเมนิ คณุ ภาพเชงิ วชิ าการจากผเู้ ขา้ รว่ มประชมุ 20
หลกั การและเหตุผล
กาํ หนดการอบรม 69
เอกสารประกอบการบรรยาย 122
164
ความคาดหวงั ของผชู้ าํ นาญการในการพจิ ารณาการตรวจสอบ
ความถกู ตอ้ งของวธิ วี เิ คราะหเ์ พอ�ื การขน�ึ ทะเบยี นตาํ รบั 181
Analytical Method Validation : Characteristics and 215
Requirements 234
Application of Best Practices in Analytical Method Validation
268
Analytical Method Validation Protocol and Report ���

Differences between Method Verification and Method
Validation

Suitability Test for Microbiological Test
Challenges in Analytical Method Transfer

Method Validation for Elemental Impurities according to USP
requirements

รายนามผเู้ ขา้ รว่ มแสดงสนิ คา้ ในงานประชมุ

สมคั รสมาชกิ สมาคม

หนงั สอื ประกอบการประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562
สมาคมเภสชั กรอตุ สาหการ (ประเทศไทย)
TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association
บรรณาธิการ

ภก.ชยั สณั ฑ์ ศรวี ชิ ชุพงษ์

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

2 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

เรยี น ผเู้ ขา้ รว่ มประชมุ ทกุ ทา่ น
เรอ�ื ง การประเมนิ คณุ ภาพเชงิ วชิ าการจากผเู้ ขา้ รว่ มประชมุ

เน�อื งจากสมาคมเภสชั กรอตุ สาหการ (ประเทศไทย) ไดร้ บั การรบั รองเป็น
สถาบนั หลกั ทจ�ี ดั การศกึ ษาต่อเน�อื งสาํ หรบั ผลติ กจิ กรรมทใ�ี หก้ ารกาํ หนดและรบั รองหน่วย
กติ การศกึ ษาต่อเน�อื งทางเภสชั ศาสตร์ จงึ ตอ้ งปฏบิ ตั ติ ามประกาศสภาเภสชั กรรม ท�ี
��/���� โดยในขอ้ � กาํ หนดอาํ นาจและหน้าทข�ี องสถาบนั หลกั ขอ้ ย่อย “2.1 เป็นแหลง่
ผลติ กจิ กรรมการศกึ ษาต่อเน�อื ง โดยมกี ารประเมนิ คณุ ภาพเชงิ วชิ าการจากผเู้ ขา้ รว่ มทกุ
ครงั� เพอ�ื ใหก้ จิ กรรมทจ�ี ดั ขน�ึ มมี าตรฐาน”

โดยกจิ กรรมการประชุมวชิ าการในครงั� น�ไี ดร้ บั การรบั รองหน่วยกติ การศกึ ษา
ต่อเน�อื งทางเภสชั ศาสตร์ เพอ�ื ใหส้ อดคลอ้ งกบั ขอ้ กาํ หนดดงั กลา่ วจงึ ขอความร่วมมอื
ผเู้ ขา้ ร่วมประชมุ ทุกทา่ นประเมนิ คุณภาพเชงิ วชิ าการผ่านการทาํ แบบสอบถามโดย Scan
QR Code หรอื เขา้ ไปยงั Website เพ�อื เขา้ ทาํ แบบสอบถามของการประชมุ ในครงั� น�ี

วนั องั คารท�ี 12 พฤศจิกายน 2562 วนั พธุ ที� 13 พฤศจิกายน 2562

สามารถใช้ Application LINE ในการ Scan QR Code โดยไปท�ี Add friends >

QR Code > QR Code Reader > Open > เรม�ิ ทาํ แบบประเมนิ ผลการประชุมวชิ าการ

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 3

การประชมุ วิชาการครงั� ที� 4/2562
สมาคมเภสชั กรอตุ สาหการ (ประเทศไทย)
เร�ือง Analytical Method Validation for FDA Compliance
วนั องั คารที� �� และวนั พธุ ที� �� พฤศจิกายน ����
โรงแรมแอมบาสซาเดอร์ สขุ มุ วิท �� กรงุ เทพฯ

หลกั การและเหตผุ ล
การประกันคุณภาพผลิตภัณฑ์ยา โดยการควบคุมคุณภาพของวัตถุดิบและ

ผลติ ภณั ฑ์ยาจําเป็นต้องใชว้ ธิ วี เิ คราะหท์ ดสอบทน�ี ่าเช�อื ถอื ใหผ้ ลการวเิ คราะห์ทดสอบท�ี
ถูกต้องและแม่นยํา วิธีการวิเคราะห์ทดสอบดังกล่าวจึงจําเป็นท�ีจะต้องดําเนินการ
ตรวจสอบความใช้ได้ท�เี รยี กว่า การตรวจสอบความถูกต้องของวธิ วี เิ คราะห์ (Analytical
Method Validation) หวั ข้อการวิเคราะห์ทดสอบ (Test items) รวมทงั� วิธีการวิเคราะห์
ทดสอบในหวั ขอ้ เหล่านนั� มหี ลายประเภท ซง�ึ มที งั� การทดสอบทางเคมแี ละทางชวี ภาพ เช่น
การวเิ คราะห์หาปรมิ าณตวั ยาสาํ คญั (Assay) การทดสอบการละลาย (Dissolution) การ
วเิ คราะหท์ ดสอบสารปนเป�ือน (Impurities) ทงั� ทเ�ี ป็น Organic และ Inorganic impurities
รวมทงั� Residual solvents ดงั นนั� การทาํ ความเขา้ ใจหลกั การ ตลอดจนการพจิ ารณาหวั ขอ้
ทต�ี ้องดําเนินการตรวจสอบความถูกต้อง จงึ มคี วามจําเป็น ตงั� แต่ขนั� ตอนการพฒั นาสูตร
ตํารบั การควบคุมคุณภาพระหว่างการผลติ และผลติ ภณั ฑส์ าํ เรจ็ รูป การตรวจสอบความ
ถกู ตอ้ งของกระบวนการผลติ (Process validation) การตรวจสอบความถกู ตอ้ งของการทาํ
ความสะอาด (Cleaning validation) ตลอดจนการศกึ ษาความคงสภาพ

ปัจจุบนั USP มกี ารปรบั ปรุงการควบคุมคุณภาพในสว่ นของโลหะหนัก (Heavy
metals) ม า เ ป็ น Elemental impurities ต า ม General Chapter <� � � > Elemental
impurities-Limits และ <���> Elemental impurities-Procedures ในการทดสอบดงั กล่าว
กจ็ าํ เป็นตอ้ งมกี ารตรวจสอบความถกู ตอ้ งดว้ ยเชน่ กนั

นอกจากน�ีหากมกี ารใชว้ ธิ กี ารวเิ คราะหท์ �ถี ูกพฒั นาและตรวจสอบความถูกต้อง
จากหอ้ งปฏบิ ตั กิ ารหน�ึง (Transferring unit) โดยอกี หอ้ งปฏบิ ตั กิ ารหน�งึ (Receiving unit)
เช่นห้องปฏบิ ตั กิ ารของฝ่ ายควบคุมคุณภาพจะใชว้ ธิ ที พ�ี ฒั นาจากหอ้ งปฏบิ ตั กิ ารวจิ ยั และ
พฒั นา จาํ เป็นตอ้ งมกี ระบวนการทท�ี าํ ใหม้ นั� ใจไดว้ า่ Receiving unit จะสามารถดาํ เนนิ การ
ทดสอบได้อย่างถูกต้อง ให้ผลการทดสอบท�นี ่าเช�อื ถือ โดยกระบวนการดงั กล่าวได้แก่
Method Transfer ซ�งึ เป็นกระบวนการหน�ึงท�ถี ูกระบุได้ใน General Chapter ของ USP
(<����> Transfer of Analytical Procedures)

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

4 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

วตั ถปุ ระสงคก์ ารเรียนรู้ (Learning Objective)
1. เพอ�ื ใหก้ ารดาํ เนนิ งานดา้ นการวเิ คราะหท์ ดสอบของหอ้ งปฏบิ ตั กิ ารใหผ้ ลการ

วเิ คราะหท์ �ี ถกู ตอ้ ง น่าเชอ�ื ถอื
2. เพอ�ื เขา้ ใจความหมายและความสาํ คญั ของการตรวจสอบความถกู ตอ้ งของวธิ ี

วเิ คราะห์
3. เพอ�ื ใหส้ ามารถนําหลกั การของการตรวจสอบความถกู ตอ้ งของวธิ วี เิ คราะหไ์ ป

ประยกุ ตใ์ ชไ้ ดอ้ ยา่ งถกู ตอ้ ง
4. เพอ�ื เขา้ ใจความหมายและความสาํ คญั ของการถ่ายโอนวธิ กี ารวเิ คราะหร์ ะหวา่ ง

หอ้ งปฏบิ ตั กิ าร

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 5

กาํ หนดการอบรม

เรื�อง Analytical Method Validation for FDA Compliance
โรงแรมแอมบาสซาเดอร์ สขุ มุ วิท �� กรงุ เทพฯ

*****************************

วนั องั คารท�ี �� พฤศจิกายน ����
�.�� - �.�� น. ลงทะเบยี นและรบั เอกสาร
�.�� - �.�� น. นายกสมาคมฯ กล่าวตอ้ นรบั และเปิดงาน
�.�� - ��.�� น. ความคาดหวงั ของผชู้ ํานาญการในการพจิ ารณาการตรวจสอบความถูกตอ้ งของ

วธิ วี เิ คราะหเ์ พอ�ื การขน�ึ ทะเบยี นตาํ รบั
ภญ. ศศดิ า อยสู่ ขุ
เภสชั กรชํานาญการพเิ ศษ สํานกั ยาและวตั ถเุ สพตดิ กรมวทิ ยาศาสตรก์ ารแพทย์
10.00 - ��.�� น. พกั รบั ประทานอาหารวา่ งและชมการแสดงสนิ คา้
��.�� - ��.�� น. Analytical Method Validation: Characteristics and Requirements
ภญ. ดร. สภุ าณี ดวงธรี ปรชี า
อดตี เภสชั กรเชย�ี วชาญดา้ นคณุ ภาพและความปลอดภยั สาํ นักยาและวตั ถเุ สพตดิ
กรมวทิ ยาศาสตรก์ ารแพทย์
��.�� - ��.�� น. Application of Best Practices in Analytical Method Validation (Part I)
ภญ. พรอ้ มพร จาํ นงธนาโชติ
ผจู้ ดั การฝ่ายประกนั คณุ ภาพ บรษิ ทั เมดกิ า อนิ โนวา จาํ กดั
ภญ. แคทลยี า นิรงั สรรค์
หวั หน้าแผนกพฒั นาวธิ วี เิ คราะห์ ฝ่ายประกนั คุณภาพ องคก์ ารเภสชั กรรม
��.�� - ��.�� น. รบั ประทานอาหารกลางวนั
��.�� - ��.�� น. Application of Best Practices in Analytical Method Validation (Part II)
ภญ. พรอ้ มพร จาํ นงธนาโชติ
ผจู้ ดั การฝ่ายประกนั คณุ ภาพ บรษิ ทั เมดกิ า อนิ โนวา จาํ กดั
ภญ. แคทลยี า นิรงั สรรค์
หวั หน้าแผนกพฒั นาวธิ วี เิ คราะห์ ฝ่ายประกนั คณุ ภาพ องคก์ ารเภสชั กรรม
��.�� - ��.�� น. พกั รบั ประทานอาหารวา่ งและชมการแสดงสนิ คา้
��.�� - ��.�� น. Analytical Method Validation Protocol and Report
ภญ. แคทลยี า นิรงั สรรค์
หวั หน้าแผนกพฒั นาวธิ วี เิ คราะห์ ฝ่ายประกนั คุณภาพ องคก์ ารเภสชั กรรม

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

6 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

��.�� - ��.�� น. Differences between Method Verification and Method Validation
ภญ. นพวรรณ องั กูรศนั สนีย

รกั ษาการ ผอู้ ํานวยการกองบรหิ ารระบบคณุ ภาพ การประกนั คณุ ภาพ
โรงงานผลติ ยารงั สติ 1 องคก์ ารเภสชั กรรม

*****************************

วนั พธุ ที� 13 พฤศจิกายน 2562

�.�� - ��.�� น. Suitability Test for Microbiological Test
ภญ. พรรณรชั ต์ พรหมเพญ็

หวั หน้าแผนกงานชวี วเิ คราะห์ การประกนั คณุ ภาพ โรงงานผลติ ยารงั สติ � องคก์ าร
เภสชั กรรม

10.30 - ��.�� น. พกั รบั ประทานอาหารวา่ งและชมการแสดงสนิ คา้
��.�� - ��.�� น. Challenges in Analytical Method Transfer

ภญ. นพวรรณ องั กูรศนั สนีย

รกั ษาการ ผอู้ ํานวยการกองบรหิ ารระบบคณุ ภาพ การประกนั คณุ ภาพ
โรงงานผลติ ยารงั สติ � องคก์ ารเภสชั กรรม
��.�� - ��.�� น. รบั ประทานอาหารกลางวนั

��.�� - ��.�� น. Method Validation for Elemental Impurities according to USP
requirements

ภญ. เกศนิ ี แสงจนั ทร์

ผจู้ ดั การฝ่ายควบคมุ คุณภาพ บรษิ ทั อารเ์ อกซ์ แมนูแฟคเจอรงิ� จาํ กดั
��.�� - ��.�� น. พกั รบั ประทานอาหารวา่ งและชมการแสดงสนิ คา้

��.�� - ��.�� น. ประสบการณ์การพบขอ้ บกพรอ่ งในเรอ�ื ง Analytical Method Validation
จากการขน�ึ ทะเบยี นตํารบั ยา

ทมี วทิ ยากรผบู้ รรยาย

*****************************

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 7

ภญ. ศศิดา อย่สู ขุ

ตาํ แหน่งปัจจบุ นั
เภสชั กรชาํ นาญการพเิ ศษ
หวั หน้ากลมุ่ ตรวจคณุ ภาพเภสชั ภณั ฑท์ างเคม-ี ฟิสกิ ส์
สาํ นกั ยาและวตั ถุเสพตดิ กรมวทิ ยาศาสตรก์ ารแพทย์
ประวตั ิการศึกษา

- เภสชั ศาสตรบณั ฑติ จฬุ าลงกรณ์มหาวทิ ยาลยั
- เภสชั ศาสตรมหาบณั ฑติ จฬุ าลงกรณ์มหาวทิ ยาลยั
ตาํ แหน่งหน้าที�การงาน:
-สาํ นกั ยาและวตั ถุเสพตดิ กรมวทิ ยาศาสตรก์ ารแพทย์ (���� - ปัจจบุ นั )
-เป็นผตู้ รวจประเมนิ ดา้ นวชิ าการ (Technical Assessor) ตามมาตรฐาน
ISO/IEC �����:���� (���� - ����)
-เป็นผตู้ รวจประเมนิ ดา้ นระบบ (Lead Assessor) ตามมาตรฐาน ISO/IEC
�����:���� (���� - ปัจจุบนั )
-เป็นผพู้ จิ ารณาทะเบยี นตาํ รบั ยาดา้ น Quality

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

8 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

ความคาดหวงั ของ
ผชู้ าํ นาญการในการพิจารณา
การตรวจสอบความถกู ต้อง
ของวิธีวิเคราะหเ์ พ�ือการขึน�
ทะเบียนยา

ภญ. ศศิดา อย่สู ขุ
สาํ นักยาและวตั ถเุ สพติด
กรมวิทยาศาสตรก์ ารแพทย์
12 พฤศจิกายน 2562

P.5.3 Method Validation/Verification

–มี Protocol สาํ หรบั การทาํ Method validation โดยมีรายละเอียด
การเตรียม test solution ต่างๆ ที�ใช้ในแต่ละ validation parameter

–ระบุ acceptance criteria

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 9

Method Validation / Verification

• Protocol : Procedure, Acceptance criteria, Approval
• Report
• ปัญหา :

1. ไมพ่ บ protocol, ไม่มีข้อมลู เก�ียวกบั ขนั� ตอนการทาํ method
validation/verification

2. ไมแ่ นบ chromatogram/ ขยาย chromatogram
3. พบมีการทาํ method validation/verification ภายหลงั การวิเคราะหย์ า

Method Transfer

• Transferring unit (TU) : R&D lab, จา้ ง lab อ�ืน

- Laboratory which developed and validated the analytical method

• Receiving unit (RU) : Routine QC lab

- Laboratory which is being qualified on the validated method

ปัญหา : ไมพ่ บการทาํ method transfer ในกรณีที� Lab QC ไมไ่ ด้เป็น
ผทู้ าํ method validation (ต้องแนบ method transfer protocol &
report)

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

10 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Forced degradation study

• Potential environmental condition : 40°C and 75%RH, Oxidation,
acid and base hydrolysis, thermal degradation, photolysis

• To achieve 10 to 30% degradation
• ปัญหา : ไม่พบการเสื�อมสลายในสภาวะต่างๆที�ศึกษา

Relative Response Factor

• Relative response factor :

– the ratio of the response factor of individual related substance to that of
a drug substance

– to correct for differences in the response of related substances and that
of the drug substance.

• ปัญหา : ไมแ่ สดงที�มาของค่า Relative response factor

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 11

Range

• Range

– the ratio interval between the upper and lower concentrations of analytes in
the sample for which it has been demonstrated that the analytical
procedure has a suitable level of precision, accuracy and linearity

• Range requirement

• Assay: 80%-120%
• Related substance : LOQ-120%of specification limit
• Dissolution : ±20% over the specified range
• Content uniformity : 70%-130%

• ปัญหา : การศึกษา range ของ Dissolution/related substance ไม่
ครอบคลมุ ตามเกณฑท์ �ีกาํ หนด

LOQ/LOD (1)

• The lowest amount of analyte in a sample that can be determined
quantitatively with suitable precision and accuracy

• LOQ should be NMT the ICH reporting level
• LOD should be below the ICH reporting level
• ปัญหา : ไม่พบการศึกษา precision & accuracy, Linearity ท�ี LOQ

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

12 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

LOQ/LOD (2)

• Two types of approaches can be used to determine LOQ/LOD

– Signal-to-noise approach
– Standard deviation approach

• ปัญหา : ไมม่ ีรายละเอียดของการศึกษาเตรียม solution

Robustness

• Robustness

– To verify that the method performance is not affected by
typical changes in normal experiment

– The variation in method conditions for robustness should be
small and reflect typical day-to-day variation

• ปัญหา : ไมพ่ บการศึกษาหวั ข้อ Robustness

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 13

System suitability

• System suitability is part of method validation. Experience
gained during method development will give insights to help
determine the system suitability requirement of the final
method

• System suitability parameter : precision of repetitive
injections, resolution, tailing factor, number of theoretical
plates and capacity factor

• ปัญหา : ไมพ่ บการกาํ หนด system suitability

Related substances (1)

• LOQ, Linearity & Accuracy : should established from the ICH reporting limit

Maximum daily dose Threshold

Thresholds for Reporting

≤1 g 0.1%

>1 g 0.05%

• ปัญหา : LOQ, Linearity, Accuracy ศึกษาที�ระดบั ไมล่ งถึง the ICH reporting limit
• USP : Disregarded peak is generally 0.05%

ประชุมวชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

14 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Related substances (2)

• ปัญหา

- ไมร่ ะบุ Relative retention time (RRT)
- ไมร่ ะบุ The reporting threshold or Disregard peak
- การคาํ นวณ ให้แสดงแต่ละ factor ที�เก�ียวข้องให้ครบ
- ไมม่ ีการฉีดเพื�อ peak Identification กรณีมีสารมาตรฐานของแต่ละ

related substance

P.5.2 Analytical Procedure

– รายละเอียดของวิธีวิเคราะห์ Assay, Related substances ในการควบคมุ
คณุ ภาพครบถว้ น ได้แก่ Std. solution sample solution, system
suitability solution รวมถึงวิธีการเตรียม Mobile phase, Buffer solution,
Diluent, Reagent ต่างๆ (P.5.2 Analytical procedure)

– ห้ามลอกตาม USP/BP

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 15

P.5.3 Method Validation : Specificity

– Solution ต่างที�ใช้ในการศึกษา Specificity ได้แก่ Blank solution, Placebo,
drug substance, stressed sample, authentic sample of critical related
substances พรอ้ มระบวุ ิธีเตรียม

– แนบ Chromatogram ของ Solution ต่างท�ีใช้ในการศึกษา Specificity
– แสดง peak purity กรณี PDA detector (purity angle < purity threshold)
– สรปุ ว่าตวั ยาสาํ คญั สลายตวั /stable ที�condition ใด

P.5.3 Method Validation : Specificity

ประชุมวชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

16 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

P.5.3 Method Validation : Linearity

– Test method รวมถึงการเตรยี ม std. solution ที�ความเข้มข้นต่างๆ
• Dilution of a std. stock solution
• Using different weights of std.

– Acceptance criteria
– Linearity & range Requirement :

• Assay: 80%-120%
• Related substance : LOQ-120%of specification limit
• Dissolution : ±20% over the specified range
• Content uniformity : 70%-130%

P.5.3 Method Validation : Linearity

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 17

P.5.3 Method Validation : Accuracy

– Test method รวมถึงการเตรียม std solution ,spiked placebo,
Sample spiked with ref. std. ต่างๆ

– The range for the accuracy limit should be within the range
Level (%) Amount added Amount found %Recovery %RSD
– Ac70c%eptance criteria
70%

70%

100%

100%

100%

130%

130%

130%

P.5.3 Method Validation : Precision

–Test method รวมถึงการเตรียม test solution ต่างๆ
–Acceptance criteria
–Intermediate precision ระบุมีรายละเอียดปัจจยั ที�ใช้ในการศกึ ษา
–Two option

• A min. of nine determinations covering the specified range
• A min. of six determinations at 100% of the test concentration

–ตารางแสดงผลการศึกษา ,%RSD

ประชุมวชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

18 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

P.5.3 Method Validation : LOQ/LOD

–Test method รวมถงึ การเตรียม std. solution ต่างๆ
– กรณี based on Signal to noise

• แนบChromatogram with clear & symmetrical peak และแสดงการ
คาํ นวณ S/N

–กรณี based on SD of Response & Slope

• แสดง Linear of regression. Standard Deviation (SD) of the Response
and the Slope.

• แนบ chromatogram และการคาํ นวณ

THANK YOU

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 19

ภญ.ดร.สภุ าณี ดวงธีรปรชี า

Education
����-���� Ph.D. in Pharmaceutical Science,

Osaka University, Japan
����-���� Master of Pharmaceutical Sciences,

Chiba University, Japan
����-���� B.Sc in Pharm.,

Chulalongkorn University, Thailand
Work Experiences
1982-2019 Bureau of Drug and Narcotic, Department of Medical sciences,

Ministry of Public Health
• Expert Pharmacist (Drug Quality and Safety) from 2015-2019.
• Head of Chemical and Physical Testing Laboratory from year 2008- 2015.
• Reviewer for approval the quality control part for the registration of

pharmaceutical products in Thailand.
• Lead assessor and technical assessor of ISO/IEC 17025.
• Analytical method development and validation.
• Laboratory skill and experiences in quality control of pharmaceutical

products including traditional medicines and veterinary medicines.
• Technical advisor in quality control of pharmaceutical products.
• Bureau’s delegate in the meetings of Asean Consultative Committee for
Standards and Quality Product Working Group on Pharmaceutical (ACCSQ-
PPWG) and Asean Consultative Committee for Standards and Quality Product
Working Group on Traditional Medicines and Health Supplements (ACCSQ-
TMHS), 2006-2011.

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

20 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Analytical Method
Validation

Supanee Duangteraprecha, Ph.D.

1

Scope :

• Overview of ASEAN Guideline for Validation of
Analytical Procedures

• Strategy for Validation of Methods
• Some Common Mistakes

2

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 21

ASEAN GUIDELINE FOR
VALIDATION OF ANALYTICAL PROCEDURES

3

Analytical methods need to be validated

"The process of providing documented evidence that
something does what it is intended to do."

 All newly developed methods
 Some modifications to methods
 Some extentions to methods (e.g. use the method
outside the validated range, used for different matrix
etc.)

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

22 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Objective

• The objective of validation of an analytical
procedure is to demonstrate that it is suitable for
its intended purpose.

5

Scope

• provide guidance and recommendation of validation of
the analytical procedures for submission as part of
registration applications within ASEAN.

• it mainly adopts two ICH guidelines “Q2A: Validation of
Analytical Methods: Definitions and Terminology, 27
October 1994” and “ICH Q2B: Validation of Analytical
Procedure: Methodology, 6 November 1996.
[Q2(R1)]

• the methodology applied for biological and
biotechnological products may be approached differently
than chemical entities.

6

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 23

Types of Analytical Procedures
to be Validated

• Identification tests.
• Quantitative tests for impurities' content.
• Limit tests for the control of impurities.
• Quantitative tests of the active moiety in samples

of drug substance or drug product or other
selected component(s) in the drug product.

7

Criteria For Analytical Test Validation

ACCURACY PRECISION
SPECIFICITY
REPEATABILITY

LIMITS INTERMEDIATE
PRECISION

LINEARITY DETECTION RANGE
QUANTIFICATION

8

ประชุมวชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

24 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Table

9

Symbols

- signifies that this characteristic is not normally evaluated
+ signifies that this characteristic is normally evaluated

(1) in cases where reproducibility (see glossary) has been
performed, intermediate precision is not needed
(2) lack of specificity of one analytical procedure could
be compensated by other supporting analytical
procedure(s)
(3) may be needed in some cases

10

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 25

Specificity

Is this analytical Suppose we alter
procedure specific test conditions
for the drug under test?
slightly?

11

Specificity (1)

• Specificity is the ability to assess unequivocally
the analyte in the presence of components which
may be expected to be present.

• Typically these might include impurities,
degradants, matrix, etc.

• Lack of specificity of an individual analytical
procedure may be compensated by other
supporting analytical procedure(s).

12

ประชุมวชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

26 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Specificity (2)

• An investigation of specificity should be conducted
during the validation of identification tests, the
determination of impurities and the assay.

– The procedures used to demonstrate specificity will depend on
the intended objective of the analytical procedure.

• It is not always possible to demonstrate that an
analytical procedure is specific for a particular analyte
(complete discrimination).

– In this case a combination of two or more analytical
procedures is recommended to achieve the necessary level of
discrimination.

13

Spectra Comparison

Enrofloxacin
Ciprofloxacin

Norfloxacin

14

Norfloxacin สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 27
Ciprofloxacin
EnrofloxacinHPLC Chromatogram

15

Identification

• Suitable identification tests should be able to
discriminate between compounds of closely related
structures which are likely to be present.

– The discrimination of a procedure may be confirmed by
obtaining positive results (perhaps by comparison with a
known reference material) from samples containing the
analyte, coupled with negative results from samples which do
not contain the analyte.

– In addition, the identification test may be applied to materials
structurally similar to or closely related to the analyte to
confirm that a positive response is not obtained.

16

ประชุมวชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

28 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Assay and Impurity Test(s)

• For chromatographic procedures, representative chromatograms
should be used to demonstrate specificity and individual
components should be appropriately labelled.

• Critical separations in chromatography should be investigated at
an appropriate level.

– For critical separations, specificity can be demonstrated by the resolution of
the two components which elute closest to each other.

• In cases where a non-specific assay is used, other supporting
analytical procedures should be used to demonstrate overall
specificity.

– For example, where a titration is adopted to assay the drug substance for
release, the combination of the assay and a suitable test for impurities can
be used.

17

Impurities are available (1)

• For the assay , this should involve demonstration of
the discrimination of the analyte in the presence of
impurities and/or excipients;

• practically, this can be done by spiking pure substances
(drug substance or drug product) with appropriate levels
of impurities and/or excipients and demonstrating that
the assay result is unaffected by the presence of these
materials (by comparison with the assay result obtained
on unspiked samples).

18

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 29

Impurities are available (2)

• For the impurity test, the discrimination may
be established by:

– spiking drug substance or drug product with
appropriate levels of impurities and

– demonstrating the separation of these impurities
individually and/or from other components in the
sample matrix.

19

Impurities are not available

• If impurity or degradation product standards are
unavailable, specificity may be demonstrated by
comparing the test results of samples containing
impurities or degradation products to a second well-
characterized procedure e.g.: pharmacopoeial method
or other validated analytical procedure (independent
procedure).

• As appropriate, this should include samples stored
under relevant stress conditions:

– light, heat, humidity, acid/base hydrolysis and oxidation.
– for the assay, the two results should be compared.
– for the impurity tests, the impurity profiles should be

compared.

20

ประชุมวชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

30 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Specificity : Assay and Impurity tests

• Chromatographic Methods

- Demonstrate resolution
Impurities/Degradants Available

- Spike with impurities/degradants
- Show resolution and a lack of interference
Impurities/Degradants Not Available
- Stress samples
- For assay, stressed and unstressed samples should be
compared.
- For impurity tests, impurity profiles should be compared.
Stress to effect 10-15% degradation

21

Forced Degradation Studies

• Heat (50-60 oC)
• Humidity (70-80%)
• Acid Hydrolysis (0.1N HCl)
• Base Hydrolysis (0.1N NaOH)
• Oxidation (3% H2O2)
• Light (UV/Vis/Fl)

22

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 31

Linearity and Range

‘Know that it’s a straight line’
vs

‘For what concentrations is it a
straight line’

23

Linearity and Range

Concentration
mg/mL

Response

• ‘Know that it’s a straight line’ versus ‘For what
concentrations is it a straight line’

– Is it a straight line between 0.4 & 0.6 mg/mL?
– Over what range is it a straight line?
– Answer: approx 0.25-0.70 mg/mL

24

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

32 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

LINEARITY (1)

• A linear relationship should be evaluated across
the range of the analytical procedure.

• It may be demonstrated directly on the drug
substance by:

– dilution of a standard stock solution and/or (system linearity)
– separate weighings of synthetic mixtures of the drug

product (method linearity)

using the proposed procedure.

25

LINEARITY (2)

• Linearity should be evaluated by visual inspection of a plot of
signals as a function of analyte concentration or content.

• If there is a linear relationship, test results should be evaluated by
appropriate statistical methods, for example, by calculation of a
regression line by the method of least squares.

• In some cases, to obtain linearity between assays and sample
concentrations, the test data may need to be subjected to a
mathematical transformation prior to the regression analysis.
Data from the regression line itself may be helpful to provide
mathematical estimates of the degree of linearity.

• For the establishment of linearity, a minimum of 5
concentrations is recommended.

26

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 33

• Data obtained from the regression line used to
estimate degree of linearity
- Correlation coefficient (r) (preferably > 0.995)

- Y-intercept (nmt 2% of the response of 100%
working concentration)

- Slope of the regression line
- data point VS. best fit line

27

Example

• Taken from:
ASEAN Operational Manual for Implementation of GMP
ed. 2000 p.403

• Seven solutions containing different concentrations
(0.280 – 0.520) mg/ml of ketotifen fumarate in tablet
“batch no. 2506 VAMG were assayed using HPLC

• The results were evaluated statistically and the results
shown on the following slide

28

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

34 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Example (continued)

Concentration of ketotifen fumarate Area detected Acceptance
criteria
mg/ml % 1473566
0.280 1677013 > 0.998
0.320 70 1904848
0.360 80 2091215
0.400 90 2293647
0.440 100 2518976
0.480 110 2670144
0.520 120
Regression: y = ax + b 130

a = 5055766.964
b = 67608.786
r = 0.9992

29

RANGE

• The specified range is normally derived from linearity
studies and depends on the intended application of the
procedure.

• It is established by confirming that the analytical
procedure provides an acceptable degree of linearity,
accuracy and precision when applied to samples
containing amounts of analyte within or at the extremes
of the specified range of the analytical procedure.

30

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 35

Minimum Specified Ranges (1)

• for the assay of a drug substance or a finished (drug)
product: normally from 80 - 120 % of the test concentration

• for content uniformity, covering a minimum of 70 -
130 % of the test concentration

• for dissolution testing: +/-20 % over the specified
range; e.g., if the specifications for a controlled released
product cover a region from 20%, after 1 hour, up to 90%,
after 24 hours, the validated range would be 0-110% of the
label claim

31

Minimum Specified Ranges (2)

• for the determination of an impurity: from the reporting level
of an impurity to 120% of the specification; for
impurities known to be unusually potent or to produce toxic or
unexpected pharmacological effects, the detection/quantitation
limit should be commensurate with the level at which the
impurities must be controlled.

• if assay and purity are performed together as one test and only a
100% standard is used, linearity should cover the range from the
reporting level of the impurities to 120% of the assay
specification

32

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

36 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Accuracy vs precision

What you
would like
to see!

33

Accuracy vs precision

• Poor accuracy
• Good precision

34

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 37

Accuracy vs precision

• Poor precision
• Good accuracy

35

Accuracy vs precision

What would you call
this?

• Totally hopeless!
• Poor precision
• Poor accuracy

36

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

38 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

So what definitions do these
concepts lead us to in the
context of assay validation?

37

ACCURACY (1)

• The accuracy of an analytical procedure expresses
the closeness of agreement between the value
which is accepted either as a conventional true
value or an accepted reference value and the
value found. This is sometimes termed trueness.

38

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 39

ACCURACY (2)

Assay of Drug Substance:
a) application of an analytical procedure to an analyte of

known purity (e.g. reference material);
b) comparison of the results of the proposed analytical

procedure with those of a second well-characterized
procedure, the accuracy of which is stated and/or
defined (independent procedure)
c) accuracy may be inferred once precision, linearity and
specificity have been established

39

ACCURACY (3)

Assay of Drug Product:
a) application of the analytical procedure to synthetic

mixtures of the drug product components to which
known quantities of the drug substance to be analysed have
been added;
b) in cases where it is impossible to obtain samples of all drug
product components, it may be acceptable either to:

– add known quantities of the analyte to the drug
product or

– to compare the results obtained from a second, well
characterized procedure, the accuracy of which is stated
and/or defined (independent procedure)

c) accuracy may be inferred once precision, linearity and
specificity have been established.

40

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

40 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

ACCURACY (4)

Impurities (Quantitation):

• Accuracy should be assessed on samples (drug substance/drug
product) spiked with known amounts of impurities.

• In cases where it is impossible to obtain samples of certain
impurities and/or degradation products, it is considered
acceptable to compare results obtained by an independent
procedure. The response factor of the drug substance can be
used.

• It should be clear how the individual or total impurities are to be
determined e.g., weight/weight or area percent, in all cases with
respect to the major analyte.

41

Recommended Data

• Accuracy should be assessed using a min. of
9 determinations over a min. of 3
concentration levels covering the specified
range (e.g. 3 concentrations/3 replicates each of
the total analytical procedure).

• Accuracy should be reported as:

– % recovery by the assay of known added amount of
analyte in the sample or as

– the difference between the mean and the accepted
true value together with the confidence intervals

42

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 41

Replicate measurements

AVG



Assessment of the suitability of the system:
replicate injections from a single solution

43

Replicate determinations

AVG



Assessment of the precision of the method:
replicate determinations of a single sample

44

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

42 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Example:

• Taken from:
ASEAN Operational Manual for Implementation of
GMP ed. 2000 p.405

• Nine solutions containing different concentrations
of ketotifen fumarate reference standard added
to ketotifen tablet batch no. 2506VAMG were
assayed

45

Example : Accuracy

Level Theoretical Experimental % Mean
spiking content content recovery recovery
80% (RSD)
100% (mg/ml) 80.20 99.63
120% 80.70 100.50 99.79
80.50 80.10 99.26 (0.64%)
80.30
80.70 101.20 100.70 100.53
101.30 100.60 (0.21%)
100.50 101.20 100.30
100.70 100.72
100.90 120.10 100.42 (0.39%)
120.50 100.58
119.60 121.50 101.17
119.80
120.10

Acceptance criteria : 98.0-102.0%

46

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 43

PRECISION

• The precision of an analytical procedure expresses the closeness
of agreement (degree of scatter) between a series of
measurements obtained from multiple sampling of the same
homogeneous sample under the prescribed conditions.

• Precision may be considered at three levels:

– repeatability,
– intermediate precision and
– reproducibility.

• Precision should be investigated using homogeneous, authentic
samples. However, if it is not possible to obtain a homogeneous
sample it may be investigated using artificially prepared samples
or a sample solution.

• The precision of an analytical procedure is usually expressed as
the variance, standard deviation or coefficient of
variation of a series of measurements.

47

Repeatability (1)

• Repeatability expresses the precision under the
same operating conditions over a short interval
of time.

• Repeatability is also termed intra-assay precision.

48

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

44 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Repeatability (2)

• Repeatability should be assessed using:

a) a minimum of 9 determinations covering
the specified range for the procedure (e.g. 3
concentrations/3 replicates each) or
b) a minimum of 6 determinations at 100% of
the test concentration.

49

Intermediate precision

• Intermediate precision expresses within-laboratories
variations: different days, different analysts,
different equipment, etc.

• The extent to which intermediate precision should be
established depends on the circumstances under which
the procedure is intended to be used.

• The applicant should establish the effects of random
events on the precision of the analytical procedure.

• Typical variations to be studied include days, analysts,
equipment, etc. It is not considered necessary to study
these effects individually. The use of an experimental
design (matrix) is encouraged.

50

สมาคมเภสชั กรอุตสาหการ (ประเทศไทย) 45

Reproducibility

• Reproducibility is assessed by means of an inter-
laboratory trial.

• Reproducibility should be considered in case of
the standardization of an analytical procedure, for
instance, for inclusion of procedures in
pharmacopoeias.

• These data are not part of the marketing
authorization dossier.

51

Recommended Data

• The standard deviation, relative standard
deviation (coefficient of variation) and
confidence interval should be reported for each
type of precision investigated.

52

ประชมุ วชิ าการครงั� ท�ี 4/2562 | 12-13 พฤศจกิ ายน พ.ศ. 2562

46 TIPA | Thai Industrial Pharmacist Association

Example

• Taken from:
ASEAN Operational Manual for Implementation of
GMP ed. 2000 p.403

• The active ingredient, ketotifen fumarate,
in tablets (batch no. 2506VAMG) was assayed
seven times using HPLC and the reference
standard

53

Example (continued)

Sample no. Concentration (mg/ml) Area detected

1 0.4 1902803
2 0.4 1928083
3 0.4 1911457
4 0.4 1915897
5 0.4 1913312
6 0.4 1897702

Mean : 1911542
Standard deviation : 10617.2
Relative standard deviation (RSD) : 0.55 %

Acceptance criteria:

Relative standard deviation (RSD): not more than 2.0%

54