2021-Toplantı-17-Konuşma-07

İlaç-ilaç etkileşimleri
ve İnterferanslar

Dr İnci SAĞLAM
Manisa Ruh Sağlığı ve Hastalıkları

Hastanesi

1

Sunum Planı

• Madde analizlerinde immünokimyasal yöntemlerde TÜRK KLİNİK
meydana gelen interferanslar BİYOKİMYA DERNEĞİ
2021-22 Yılı Güz Dönemi
- Amfetaminler -Opioidler
Bilimsel Etkinliği
- Buprenorfin -Kannabinoidler
MADDE
- Kokain -Benzodiazepinler ANALİZLERİ
SEMPOZYUMU
• Madde analizlerinde kromatografik yöntemlerde
meydana gelen interferanslar, kısıtlılıklar, zorluklar 04 Aralık 2021
Cumartesi
Bireysel Farklılılar
2
Örnek kaynaklı zorluklar

Metot kaynaklı sorunlar

Cihaz kaynaklı sorunlar

• HRLCMS/MS Örnekler

Suistimal edilen/edilebilen madde analizleri

İki basamaklı Analiz;

1- Tarama Analizleri

İmmunokimyasal yöntemler
a) POCT(Hasta başı analizler)
Lateral flow immunokromatografi
b) Laboratuvar temelli immunokimyasal analizler
CEDIA, EMIT, KIMS, FPIA …
c) Kromatografik yöntemler

2- Doğrulama Analizleri

Kromatografik yöntemler( GCMS-LCMS/MS-HRLCMS/MS)

3

POCT(Hasta başı testler)

AVANTAJLARI:

• Çok hızlı analiz
• Eğitim gerekmez
• Örnek transferi ve örnek hazırlığı gerekmez
• Birçok test aynı anda sonuçlanır

DEZAVANTAJLARI:

• İnterferansa açık (hematüri, proteinüri, hile amaçlı eklenen

maddeler, çeşitli madde ve metabolitler).

• Kullanılan antikora bağlı olarak testin performansı (sensitivitesi ve

spesifitesi) üreticiye ve kite göre değişir.

• Kalitatif oldukları için eşik konsantrasyon yoktur.

• Stripte oluşan çizginin değerlendirilmesi subjektiftir.

• Yeni maddelere yönelik test kiti üretimi, ancak antikoru piyasaya

çıktıktan sonra olabilmektedir. dipstick, cassette, test cup,
• Kalite kontrol yetersiz
multitest card 4

Laboratuvar temelli immunokimyasal analizler

AVANTAJLARI DEZAVANTAJLARI
• İdrarda madde analizlerinde en
• Analitik özgüllük düşüktür, benzer kimyasal
sık kullanılan yöntemler yapıya sahip hedef madde ailesini tespit eder
• Basit(numune alma ve
• Kitleri ayrıdır. Ortalama ticari bir test
hazırlama kolaylığı) Ucuz geliştirme süresi 2 ila 5 yıl sürer
• Otomasyona uygun
• Yüksek hassasiyet ve geniş bir • Farklı üreticiler tarafından tasarlanan kitlerde
antikor duyarlılığı farklıdır, sonuç yorumu, cut
analitik aralık (negatif örnekleri off değerleri ve referans aralıkları açısından
tutarsızlıklar olabilir.
ayırmada başarılı)
• Major avantajı hızlı geri dönüş • İnterferansa açıktır. Ak moleküle değil epitopa
spesifiktir benzer veya inaktif metabolit ile
süresi çapraz reaksiyon verir

• DOĞRULAMA yapılana kadar Olası pozitif

5

6

İmmünokimyasal yöntemlerde interferans
mekanizmaları

1. Matriks etkisi: ör:ENDOJEN MADDELER bilirubin, hemoglobin, lipidler ve paraproteinler
2. Çapraz reaksiyon: Endojen ve ekzojen kompanentlerİn reaktifdeki antikorlarlarla etkileşimi
3. Carryover veya pipetleme prop kontaminasyonu gibi sistem veya metod kaynaklı hatalar
4. Prozone (“hook”) etkisi: Kullanılan reaktifteki antikor konsantrasyonlarına bağlı olarak, çok yüksek

antijen seviyeleri tek Ag-Ak kompleksi yerine “sandviç" (antikor1 antijen antikoru 2) kompleksler
oluşturarak konsantrasyonu azaltabilir.
Hook etkisi önemli yanlış negatif sonuçlara neden olur.

5. Heterofil Antikorlar: örnekteki endojen antikorlar; otoantikorlar, makro-analitler (endojen analit

ve antikor konjugatları), makroenzimler ve romatoid faktörler

7

1.Madde analizlerinde immünokimyasal
yöntemlerde meydana gelen interferanslar

8

Tek madde analizi Madde grubu analizi
THC Amfetaminler
Buprenorfin
Opiatlar
Benzoylecgonine
6-MAM Benzodiazepinler
Metadon
Barbitüratlar
LSD
9

Amfetaminler

Fenetilamin ailesinin bir üyesidir.
• Amfetamin(Alfa metil fenetilamin)
• Metamfetamin
• MDA(metilendioksiamfetamin)
• MDMA/ekstazi(metilendioksimetilamfetamin)
• MDEA(metilendioksietilamfetamin)
• PMMA (parametoksimetamfetamin)
• PMA(parametoksiamfetamin)

10

Amfetaminler

• Presinaptik uçlardan katekolaminlerin,
özellikle dopaminin salınımına yol
açarak sempatomimetik etki gösteren
maddelerdir.

• Ödül yolağını aktifledikleri için yoğun
öfori ve bağımlılık yaparlar

• Yaygın kullanım , toksik etki
• Majormetabolitleri

hidroksimetamfetamin,
amfetamindir
• Amfetamin idrarda değişmeden atılır
• Metamfetamin %37-54 değişmeden
atılır

11

12

Amfetaminler

Amfetaminler ile çapraz rx gösterenler Amfetaminlere yapısal benzerlik gösterenler

Bupropion(ZYBAN) Sigarayı bırakmak da kullanılan Efedrin, Pseudoefedrin Birçok soğuk algınlığı
atipik bir antidepresan (60 mg) ilacında bulunur
dekonjestan

Fenofibrat Hiperlipidemi tedavisi Atomoksetin DEHB
NE reuptake inh

Labetalol Gebelikte hipertansiyonu Fenilpropanolamin Dekonjestan
kontrol etmek için yaygın olarak
kullanılan bir beta bloker

Klorpromazin (LARGACTIL) Antipsikotik Trazodon(DESYREL) ve Yaygın olarak reçete edilen
metaboliti antidepresan
metaklorofenilpiperazin(m MDMA ile çapraz rx
-CPP)
Prometazin H1 res. Antagonisti
Antihistaminik, antiemetik Dimetilamilamin (DMAA) Yaygın olarak kullanılan bir
hareket tutması enerji takviyesi olan

13

Amfetaminler

Amfetamin içerenler ya da amfetamine metabolize olanlar D ve L izomer ayırımı

Metilfenidat(RİTALİN) DEHB L-amfetamin içeren ilaçlar narkolepsi, obesite, dikkat
eksikliği ve hiperaktivite tedavisinde kullanılıyor
Vicks inhaler L-metamfetamin içerir D-metamfetamin aktif merkezi sinir sistemi(CNS)
uyarıcılardır
Mebeverin Antispazmolitik L-metamfetaminin CNS stimülasyon yapmaz ancak
Para-metoksiamfetamine vazokonstriksiyona neden olur
Prenilamin metabolize olur Yasadışı amfetamin preparatlar, tek başına d izomeri veya l
Famprofazon izomeri ile rasemik karışımlar içerebilir
Selegiline Angina tedavisi-Ca kanal blk Çoğu immünoassay kiti D-izomerine yönelik olmasına
Lisdeksamfetamin D ve L amfetamin rağmen, genellikle L-izomerleri ile çapraz reaksiyon vardır
Kromatografik yöntemler rutin doğrulamada l- ve d-
NSAI izomerleri arasında ayrım yapmaz özel kiral analiz gereklidir

Parkinson tedavisi 14
Metamfetamine metabolize

DEHB
Lizin ve d-amfetamine
dönüşür

15

Opiatlar/opioidler

• Opioidler, endojen opiat reseptörleri ile etkileşime giren
geniş bir bileşik sınıfıdır

• Opioid terimi; opioid reseptörleri ile etkileşime girebilen
herhangi birini ifade eden ve böylece tüm sınıfı kapsayan bir
terimdir.

• Opiat terimi, afyon haşhaşı, özellikle morfin ve kodeinden
türetilen formlardan oluşan opioidlerin bir alt sınıftır.

İmmünoassaylar tipik olarak morfini ve kodeini hedefler, her

ikisi de afyon haşhaşından (Papaver somniferum) doğal olarak

izole edilir

Yarı sentetik olanlar morfin bnz yapıya sahiptir, immunassay ile

yakalanabilir oysa opiat reseptörlerine bağlanan sentetik

opioidler genellikle tarama amacıyla ayrı bir yöntem gerektirir.

Dolayısıyla opioid negatif demek sentetikleri de ekarte etmek

anlamına gelir ki bu da yanlış negatif sonuç demektir.

Eroin, hidrokodon ve hidromorfonu hedef alan kitler mevcut,

ancak bu hala sadece olası pozitiflik sağlıyor. Kesin sonuç için

MS testi gereklidir 16

Saptama Penceresi
Morfin-kodein: 1-2 gün
Eroin: 3-5 dk
6-MAM: 6-12 saat

17

Opiatlar/opioidler

Haşhaş tohumu (tebain, kodein, morfin) gıda
Kodein, dihidrokodein Gribal enf
Tramadol Ağrı
Kinolonlar Antibiyotik
Nalokson Opioid doz aşımı
Rifampisin Tbc
Difenhidramin Antihistaminik/antikolinerjik
Hidrokodon, hidromorfon narkotik analjezik
Dekstrometorfan Öksürük şurubu

18

Buprenorfin

• Buprenorfin yarı sentetik opiat agonistidir. ve opioidlere bağımlı hastaların tedavisinde yaygın olarak
uygulanır

• Norbuprenorfine metabolize olur ve major metabolit norbuprenorfin-glukuronid dir. Serbest
buprenorfin ve norbuprenorfin idrarla atılır. Ancak konsantrasyonlar düşüktür ve DRI gibi serbest
norbuprenorfini hedefleyen kitlerde yanlış negatif sonuçlara neden olabilir. norbuprenorfin-glukuronid
hedefleyen CEDIA kitleri daha sensitiftir. AK spesifikliği önemli…

• Ne yapılabilir?
• İdrarı glukronidaz ile muamele edip glukuronid den ayrılarak metodun sensitivitesi yükseltilebilir.
• Buprenorfin de çapraz reaktiviteye tabidir. CEDIA buprenorfin tahlili ile tramadol etkileşimi, Cut off

değeri 5'ten 20 ng / ml'ye çıkarıldığında tüm yanlış pozitiflerin elimine edildiği görülmüş
• Antipsikotik ilaçlar amisülprid ve sulpirid CEDIA buprenorfinin kitinde yanlış pozitiflere neden olur.

Özellikle yüksek dozlarda reçete edildiğinde ve düşük cut off kullanıldığında buprenorfinde pozitiflik
görülmüş
• kodein ve morfin metabolitleri (dihidrokodein ve morfin-3-glukuronid de dahil olmak üzere ) CEDIA'da
yanlış pozitiflere neden olur
• Hidroksiklorokin ve klorokin de CEDIA buprenorfin ile çapraz reaksiyona girerken DRI kiti ile reaksiyon
vermez

19

Kokain

• Koka bitkisinin yapraklarından elde
edilen bir alkaloiddir.

• Kokain tespiti için, kitler kokainin
inaktif bir metaboliti olan
benzoilekgonin (BEG) tespit etmek
için tasarlanmıştır.

• İmmün yöntemler duyarlı ve
spesifiktir.

• Kokainin pasif solunmasını tespit
edemez

• Yerba mate veya Güney Amerika'dan
gelen çaylarda eser miktar koka yanlış
pozitif

• Saptama penceresi: 1-3 gün

20

Benzodiazepinler 21

• Benzodiazepinler de sınıf olarak taranan
maddelerdir.

• Sedasyon, anestezi, anksiyolitik ve
antikonvülzan

• oxazepam ve nordiazepam ile biten ortak
metabolik yol

• Bu yüzden de pek çok immunassay metot
nordiazepam üzerinden kalibre edilir

• Oxazepama metabolize olmayanlar idrarla
atılmadan önce glukronide olur bu da
tespitini zorlaştırır özellikle lorazepam ve
lormetazepam için

• Çözüm olarak yine idrar glukronidaz ile
muamele edilebilir Yine de bir çalışmada
%22 inin tespit edilemediği görülmüş MS
şart

• Rekreasyonel amaçlı yeni nesil
psikoaktifler ya da tasarım BNZ’ler
kullanılıyor bilgi azlığı sebebiyle yanlış
negatiflik kaynağı

Kannabis, hint keneviri, haşiş,
marihuana ve esrar

• 1.Fitokannabinoidler 11 tip olarak sınıflanır 18
2
• 2.Sentetik Kannabinoidler • DELTA 9- tetrahidrokannobinol
• Delta 8- tetrahidrokannabinol 17
• 3.Endokannabinoidler • Kannbigerol 8
• Kannabikromen 8
Kannabis bitkisinin en yaygın 3 türü: • Kannabidiol 2
Cannabis Sativa, C. indica, • Kannabinodiol 5
C.Ruderalis • Kannabielsoin 3
• Kannabisiklol 10
Kannabis bitkisinin içindeki 550 tane • Kannabinol 9
doğal bileşik--- sayısı her geçen gün • Kannabitriol 22
artmaktadır • Sınıflandırılamayanlar 22 104
• TOPLAM
En az 104 tanesi Kannabinoid
etkinlik gösterir Bunlara
Fitokannabinoidler denir

Kannabinoidler

İdrarda bulunan metaboliti 11-nor-delta 9-Tetrahidrokannabinoid(THC)
Analizde hedeflenen 9-karboksi-THC(THC-COOH) ve glukronid konjugatıdır.

Dronabinol (Marinol) ve Nabilon(Cesamet) kemoterapiye eşlik eden bulantı ve kusma için kullanılan
Drobinol (delta 9THC) sentetik kannabinoidlerdir, yapıları farklı çapraz rx vermez

AİDS hastalarında anoreksia tedavisinde kullanılıyor

Nabiksimols(sativex) MS hastalarında nöropatik ağrıda ve kanserli hastalarda
(THC ve Kannabidiol içerir) ağrı tedavisinde kullanılır FDA onayı yok pozitif sonuca
neden olur

Epidiolex (kannabidiol) Ağır çocukluk çağı epilepsileri Dravet sendromu ve Lennox-
Gastaut sendromunda FDA onayı almıştır.
Ülkemizde 2006’da kırmızı reçete ile tıbbi amaçlı
nabiksimols bulundurmak ve tedavi amacıyla yetiştirmek
yasal hale gelmiştir.

23

Sentetik kannabinoidler

• Taramada yanlış negatiflerin ana kaynağı, sentetik kanabinoidlerin
kullanılmasıdır Sentetik kanabinoidler, THC ile benzer psikoaktif
etkilere neden olmak için endojen kanabinoid reseptörlerini
bağlayabilir, ancak tamamen farklı yapılara sahiptir bu nedenle,
immünoassayları tarayan geleneksel kanabinoidler tarafından tespit
edilmezler.

• JWH-018, UR-144, AB-PINACA (IMMUNALYSIS)
• Sentetik kanabinoidleri tespit etmenin en büyük zorluklarından biri

eğlence amaçlı uyuşturucu pazarının çok hızlı değişmesi
• Avrupa Uyuşturucu İzleme Merkezi veUyuşturucu Bağımlılığı

(EMCDDA), 2020’ de izlediği psikoaktif sayısı 830

24

25

Kannabinoidler

Efavirenz (EFV) Antiretroviral tedavi(HIV)
İbuprofen, naproksen veya fenoprofen NSAI
Pantoprazol Proton pompası inh
Prometazin H1 res antagonisti
Niflumik asit NSAI
Kenevir Tohumu Gıda

26

Kannabinoidler

• THC yağda çözünür, yağ dokusunda birikir. Yavaş ekskresyon,

idrarda uzun süreli pozitiflik (tek kullanım veya uzun süreli

kullanıma göre değişir)

• Takipte kreatinin normalizasyonu önerilir Saptama penceresi:
Tek kullanım 1-3 gün

Haftada bir 7-10 gün

Kronik 30 gün

• Üç gün arayla yapılan THCA düzeyi takibinde normalizasyon
oranının bir önceki orana göre %50 veya üzerinde artış
göstermesi yeni madde kullanımını gösterir

27

Sonuç

• İdrar uyuşturucu testinde rutin olarak yanlış pozitif test sonuçlarına
rastlanmasına rağmen, bu yöntemler yaygın olarak kullanılmaktadır

• Avantajlarından dolayı immunokimyasal yöntemler olmalı ancak
kullandığımız yöntemin özellikleri bilinmeli, gerektiğinde klinisyenle
iletişime geçilmeli

• Üreticinin talimatları dikkate alınmalı gerekirse hastanenin hasta
popülasyonu ile test edilmeli

• Yanlış pozitif sonuçlar kütle spektrometresi ile kombine kromatografi
gibi daha spesifik analitik yöntemler kullanılarak doğrulanmalı

28

2. Madde analizlerinde kromatografik
yöntemlerde meydana gelen interferanslar,
kısıtlılıklar, zorluklar

29

Kromatografik Yöntemler •LC-MS / MS

•GC-MS • Üstün özgüllük, duyarlılık ve verimlilik
• Standart olmadan da hedef analitleri saptama
• Tekrarlanabilirliği, özgüllüğü ve duyarlılığı • Toksikolojide moleküllerin çoğu biyolojik olarak aktif,
yüksek
polar, termolabil ve uçucu değildir.
• Uçucu ve termal olarak stabil olan, küçük,
polar olmayan analitlerde LCMS’den • Örnek hazırlığı basittir türevlendirme gerekmez
üstündür
• Metot geliştirme, laboratuvarlar arasında farklı
• Türevlendirme gerektirir
• Adulterant eklenmiş örnekleri tespit edebilir

• Dezavantajları LC-MS / MS için iyon bskılanmasıdır.

• Nitelikli personel gerektirir

30

31

32

Bireysel Farklılılar

Vericinin fizyolojik durumu: emilim, metabolizma ve atılımı etkileyen
herhangi bir durum veya hastalık.
Karaciğer veya böbrek hastalıkları test sonucunu etkiler

33

Örnek kaynaklı zorluklar

• Numune türüne göre tespit penceresi farklıdır(hangi numune ne zaman alınmış)
• Numuneye hile girişimi; oksidan veya non-oksidan madde katılması
• İsteme amacı örneğin ‘’klinik amaçla tüm maddeler taranmalıyken işyeri taramalarında yasa

ve sözleşmelerle belirlenen maddeler taranır’’ gibi
• Analiz metodu ve SAMSHA, EWDTS gibi kuruluşların metota göre belirlediği cut off

değerleri..
• Ana madde, metabolit, metabolik yolaklar
• Hedef analite çok spesifik olmasına rağmen benzer yapılı bileşikler interferansa neden

olabilir
• Bazı maddeler değişmeden atılır diğerleri demetilasyon, oksidasyon veya indirgeme gibi

kimyasal modifikasyona uğrar. Çoğu madde ve metabolit glukronid veya sülfat
molekülleriyle konjugasyon yapar ve suda çözünür hale gelerek atılır. ilaçların çoğu
idrarda konjuge olmayan (serbest) ve konjuge ana madde ve metabolitlerinin bir
kombinasyonu olarak görülür ve herbirinin atılım süresi farklıdır( birkaç saatten günler
haftalara kadar)
• Bu yüzden böyle bileşiklerin panelde seçimi sonucu etkileyecektir.

34

Kokainle ilgili bir olgu

• Kokaine maruziyeti göstermek için;
• İDRARDA kokainin metabolitleri (benzolekgonin ve ekgonin metil ester) aranır,

ayrıca direkt kokainin kendisi de idrarda yüksek miktarda bulunur.
• Bu kişinin kokain etkisinde olup olmadığının saptanması için test KAN VEYA

TÜKÜRÜKTE yapılmalıdır, uygulanan test aktif madde kokain ve farmakolojik
olarak aktif metaboliti kokaetilen’i saptamaya yönelik olmalıdır.
• SAÇ örneğinin analizinde, kokain ve lipofilik metabolitlerine odaklanmalıdır.
• Kokain için saptanma aralığı genel olarak, kan ve tükürük için ilk 24 saat, idrar için
atılma (eliminasyon) başladıktan sonra 72 saate kadar, TERDE metabolize olmaya
başladıktan sonra (10 saat) 30 güne kadar ve saçta ilk günden sonra 250 güne
kadardır.
• Kişinin hangi zamanlarda kokaine maruz kaldığını göstermek için saç ideal bir
materyaldir.

35

36

ANALİZDE;

Zaman dağılımı Hata dağılımı

37

Metot kaynaklı sorunlar

38

Metot geliştirme basamakları

Seperasyon(ayırma)
tekniğini/ dedektörünü
seç

Numune hazırlama
tekniğini seç

Metot Optimizasyonu

39

• Analitler hidrofilik, lipofilik,
asidik, bazik özellikte olabilir.
Benzer yapısal özelliktekileri
gruplandırın.

• Özellikle matriksiniz idrar ise
metabolitleri belirleyin

40

Ekstraksiyon (Çekme)

• İki veya çok bileşenli karışımlardan bir maddeyi veya
istenmeyen safsızlıkların çözücü yardımı ile ayırma işlemine
ekstraksiyon denir. Fazlardan biri katı biri sıvı olabildiği gibi
her ikisi de sıvı olabilir.

• Ayrılması istenen karışım sıvı bileşenlerden oluşuyorsa
“sıvı–sıvı ekstraksiyon”; katı bir malzemeden bir madde
veya grup ayrılacaksa bu işleme “katı–sıvı
ekstraksiyon” denir.

41

42

Ekstraksiyon(özütleme) kaynaklı sorunlar

• Ekstraksiyon verimliliği(RECOVERY-Geri Kazanım) önemli
• Örnek ne kadar temiz olursa interferanslarınız o kadar

az olur
• Matriks özelliği önemli
• Çözünürlük ve maddenin çözücüye aktarımı önemlidir.

Özellikle katı matrikslerden kan gibi organik çözücüye
maddeyi aktarmak zordur
• İdrar daha az kompleks bir materyal olduğundan
ekstraksiyon çok daha kolaydır

43

44

45

• Bazı maddelerin ve metabolitlerin konjuge bileşikler olarak idrarla
atılımı, suda çözünürlüğünü arttırır, ancak kullanılan organik çözücü
madde ekstraksiyonu zorlaştırır. Ekstraksiyondan önce konjugatın
hidrolizi bu madde analitleri için gereklidir.

• En yaygın 3 hidroliz şekli vardır :
1. B-glukuronidaz gibi enzimatik,
2. Hidroklorik asit (HCL) kullanımı gibi asidik veya
3. Sodyum veya potasyum hidroksit kullanımı gibi bazik(NaOH, KOH).

46

• Güçlü bir asit veya baz kullanarak hidroliz ve daha yüksek sıcaklıklar
genellikle daha hızlıdır, ancak analiti bozar ya da artefakt oluşturacak
ürünler oluşturur.

• İdrar için hidroliz şart
çözücü, pH ve tampon seçimi

Maksimum verimlilik için pH ayarı(bizde fosfat tampon) yapıldıktan
sonra analit organik bir çözücüye ekstrakte edilir

****LCMS/MS;
Numune hazırlığı; ekstraksiyon veya ekstraksiyon yapılmadan
numunenin basit seyreltilmesinden ve ardından enjeksiyondan
oluşabilir (“dilute and shoot”).

47

İnternal standart(IS) ekleme IS Nedir? Neden eklenir?

Her örneğe aynı miktar IS eklenmeli aISncahkeidşeafretalinmalaitdindelfeizrikokimyasal özelliklerini taşıyan

En yaygın kullanılan iç standartlar, maddeye benzer
afiztoikmselal-rkınimınyyaesrainl i öazldeılğlikı ldeöretersyauhmipludöbtieleryşuikmleurndirh.idrojen

İdeal olarak bgireriISkaaznaanliıtmle, aaylınkıonşmekaildseüreekssi tr(aRkTte) ve
derive edilir, ve
kiyüotnleizdaeskyüoçnüktebpirkfisairkhveadrdeıfr analite benzer ve sadece

kA(öiorynnşoaeunlklilitazrailkebsaeyyrobtbanirırlniaekıfttekevidseiIilSirg,’yMsieboSin)dukeaçonimyuaiplyleigazşuintnilsradeilnemdekiışdiğeıonrvl,duaartrünymasoiyşluolemnmslaluerzrı
ePkresatrnaaklistiikyonvekayıapnlaarliıt,ikküçdüekğişpkipeneltilğeimetehlaaftialareıdevre:
enjeksiyon hacimleri, matris etkileri ve dedektör
stabilitesi, RT kontrolü

Analit konsantrasyonunu hesapblaenliırrl.erken IS
konsantrasyonuna oranlanarak

Doğru IS kuslelaçnmılemkamönaelıminliterDfeermaentsilaenevdeenhiodlruorksile
analoglar

48

1.Stabil (durgun) faz (normal- ters-
iyon değişimi)
2.Mobil(hareketli) faz(sıvı-gaz)
• A ve B mobil faz(su ve organik

bazlı)
• İzokreatik ve gradient akış
• Su-metanol-asetonitril….

• En sık kullanılan polar sorbentler( normal faz)

Ters faz kromatografisinde ise durgun faz apolar ve hareketli faz
polar niteliktedir. En sık kullanılan apolar durgun faz
organoklorosilan grubunda oktil (C8) veya oktadesil (C18)
hidrokarbon zincirinin yer aldığı fazlardır.

49

OPTİMİZASYON ÇALIŞMALARI

*pH
*sample volüm
*Hidroliz zamanı, ısısı

(enzim 50-60 derecede aktive beta glukronidaz yıkım miktarı zamanla
orantılı , sentetik gruplarda yıkımlama)

*tampon miktarı
*enzim miktarı

ÖRNEK : THC için;
Thermo Fisher colon, ACN, isopropanol, formik asit, amonyum asetat
(tuz olarak) yerine
Phnomex kolon, su, metanol, amonyum karbonat tuzu

50