QUALITY CONTROL IN STERILE PRODUCTS_Jan2563

Quantity of Articles, Volume of Medium and
Incubation Conditions (Liquid Products)

 ปริมาณของ sample ท่ีใช้ต่อ container ดรู ายละเอียดในตารางที่
1 (USP40)

 1เปก0รณิ%มฑาตด์ ขรงั อนขงี้อตVงามomเlกueณdmฑi์ขueอmงmUeทSd่ีใชPia้ 4ถ0า้(Dไมviไ่orดle้รucะmบt ุใieนnoomcfousnalamotgiporlnaep)ตh้อแงตใไห่อม้ใา่เกชจนิ้ มี
การเปลี่ยนแปลงได้ขนึ้ กบั ผลการทดสอบ method suitability
test

 สป่วรนะยปกุ รติม์ปาตริมราmตรemdieudmiumสําหตรับารวาธิ งี mท่ี e1m(UbSPr2a4n) e filtration สามารถ
 อณุ หภมู ิที่ใช้สาํ หรบั การ incubate F. ที่ 30-35 C., S. ที่ 20-25 C.

เป็นเวลาไม่น้อยกว่า 14 วนั ไม่ว่าจะใช้วิธีใดในการทดสอบ
 ระหว่าง 14 วนั ของการ incubate ถา้ sample ขุ่น พอครบ 14 วนั

ให้ sampling มา NLT 1 ml ดผู ลต่ออีก 14 วนั

Quantity of Articles, Volume of Medium and
Incubation Conditions (Liquid Products)

 ต้องมีการทาํ testing facilities ไดแ้ ก่
- clean rooms and clean zones
- isolators

 การ test ต้อง aseptic technique
 ต้องทาํ Negative control
 ต้องทาํ Positive control
 ต้องทดสอบ Bacteriostatic + Fungistatic activity ของ

ตวั อยา่ ง (Method suitability test) ถ้ามีกาํ จดั โดยใช้
neutralizing agent หรอื dilution แล้วใช้ condition ดงั กล่าว
ในการทดสอบ

Table 1 Minimum Quantities to be used for each
medium (USP40) & Minimum volume used (USP24)

USP40 Minimum volume, in ml, of each
medium (USP40)

Container Minimum volume Used for direct Used for membrane or
content taken from each inoculation to half membrane
(ml) container for each volume taken representing total volume
medium from each from the appropriate
container (ml) number of containers (ml)
< 1 ml The whole contents
of each container volume USP24
of 100
1-40 ml Half the contents
of each container sample 100
>40 ml to NMT
NMT 100 ml but NLT 1 ml 10% 100
> 100 ml volume 100
20 ml of media

10% of the
contents of the
container but not
less than 20 ml

Sterility Test USP40 Method II: Direct
Inoculation (Non-filterable liquid samples)

1 ml 1 ml Non-filterable
liquid samples

FTG SCDM

30-35 °C 20-25 °C

15 ml 15 ml

Incubate ตาม condition ท่ีกาํ หนดไม่นอ้ ยกวา่ 14 วนั

Sterility Test USP34 Method I: Membrane
Filtration Method (Liquid samples)

n …2 EntireContent

Rinse ด้วย 1
≥ 100 ml 0.45 µ
diluting and
rinsing fluid

FTG sample SCDM
30-35 °C 100 ml 20-25 °C
ไมน่ อ้ ยกวา่ 14 วนั ไมน่ อ้ ยกวา่ 14 วนั

100 ml

Method Suitability Test
(Validation Tests for

Bacteriostasis and Fungistasis )

 กอ่ นการทดสอบ sterility test ตอ้ งแน่ใจว่า bacteriostatic และ
fungistatic activity ทม่ี ใี น sample ไมร่ บกวนผลการทดสอบ

 ทาํ เมอ่ื
 เป็นการทดสอบตวั อย่างใหม่
 มกี ารเปลย่ี นแปลงสภาวะการทดสอบ

 มี 2 วธิ ี ตามวธิ กี ารทดสอบ sterility test

 Membrane filtration

 Direct Inoculation

Method Suitability Test : Membrane

filtration test

กรองผา่ นเยอ่ื กรอง 0.45 µm

Rinse ด้วย 3 21

100 ml normal 3rd rinse
diluting and Inoculated 3rd rinse
sample
rinsing fluid

Positive Incubate
control ไม่เกินกวา่ 5 วนั

Method Suitability Test : Membrane

filtration test

 หาก sample มี bact & fungistatic activity
 dilute จนไม่มี activity โดย diluting and
rinsing fluid (fluid A, fluid D, fluid K)
 เปลย่ี น membrane filter
 ใช้ neutralizing agent
 กรณที ใี่ ช้ rinsing fluid 100 ml ล้างจํานวน 5 คร้ัง
แล้วยงั กาํ จัด bact & fungistatic activity ของ
sample ไมไ่ ด้ ใหท้ ดสอบ sterility test ไดเ้ ลย

Selected Antibacterial Substances and Their
Inactivation for Sterility Testing

Substance Method of Inactivation

Phenol Dilution 1: 50
Alcohol
Dilution 1:50
MP, PP Inactivation with 10% Tween 20

Benzalkonium Inactivation with 5% Tween 20/80 or 0.5%
chloride Tween 80 with 0.07 % lecithin

Inactivation with 3% Tween 80 with 0.5 %
lecithin

Penicillin Incubation with highly active penicillinase
Barbiturates
Polymyxin B sulfate Dilution to less than 0.2 %

Inactivation with 0.5 % lecithin with 4%
glycerin in nutrient broth

Sterile Diluting and Rinsing Fluid for
Membrane Filtration

 Fluid A peptic digest of animal tissue in water
“main diluting fluid”

 Fluid A for penicillins and cephalosporins
Aseptically add to Fluid A, sterile β-lactamase.

 Fluid D Fluid A + polysorbate 80
Use this fluid for articles containing lecithin or oil, or

for devices labeled as “sterile pathway ”.
 Fluid K peptic digest of animal tissue + beef extract

+ polysorbate 80 in water
Use this fluid for articles containing petrolatum and for

rinsing pathways of devices

Method Suitability Test: Direct Inoculation

Positive sample
control

Inoculated medium

Incubate ตาม condition ท่ีกาํ หนดไม่เกิน 5 วนั

หมายเหตุ ทาํ ซํ้าเชื้อต่างชนิด, ทาํ ซํา้ media ต่างชนิด

Method Suitability Test: Direct Inoculation

 ถ้า sample มีฤทธ์ิ bacterio & fungistasis
 ให้กาํ จดั activity โดยใช้ sterile neutralizing agent เช่น
polysorbate 80, lecithin, azolecthin หรอื β-
lactamase
 ถ้า neutralizing agent ไมไ่ ด้ผลให้ใช้วิธีเพ่ิมปริมาตรของ
medium (dilution) โดยให้ใช้ปริมาตรของ medium น้อยท่ีสุด
ที่ทาํ ให้เชื้อสามารถเจริญไดเ้ มอ่ื มี sample
 ถา้ ใช้ medium จนถึง 2000 ml sample ยงั มีactivity ให้ใช้
medium 2000 ml ในการทดสอบ sterility test ยกเวน้ กรณีท่ี
ทดสอบ อปุ กรณ์ทางการแพทยส์ ามารถใช้ medium มากกวา่
2000ml ได้ หรืออาจใช้ conc medium โดยเตมิ โดยตรงในผลติ ภัณฑ์

 ถ้าตวั อยา่ งไมม่ ี activity กใ็ ช้ตวั อยา่ ง และ medium เหมือนตาราง

Test Procedures for Sterility Test USP40

Method I: Membrane Filtration Method

นิยมใช้วิธีนี้สาํ หรบั product ท่ีเหมาะกบั การกรอง
เหมาะกบั ตวั อย่างพวก liquids, soluble powder

ที่มีคณุ สมบตั ิพวกbacteriostatic& fungistatic
เหมาะกบั ตวั อย่างพวก oil, ointment, cream ท่ี

dilute เป็ น solution ได้ด้วย non-
bacteriostaticและ non-fungistatic diluting
fluid
เหมาะกบั การทาํ sterility test ของ surface หรือ
critical pathways ของเคร่ืองมือต่าง ๆ

Test Procedures for Sterility Test USP40

Method I: Membrane Filtration Method

ตวั อย่างที่ทดสอบ

1. Aqueous solutions

2. Soluble solid
3. Oil and oily solutionsK
4. Ointments and CreamsK

5. Prefilled syringes

6. Solids for Injection other than antibiotics

7. Antibiotic solids for injection

8. Antibiotic solids, bulks and blends
9. Sterile aerosol productsD
10. Devices with pathways labeled sterileD

Sterility Test USP40 Method I: Membrane
Filtration Method (aqueous solutions)

n …2 1

Rinse ด้วย
≥ 100 ml
diluting and
rinsing fluid

FTG sample SCDM
30-35 °C 20-25 °C
ไมน่ อ้ ยกวา่ 14 วนั ไม่นอ้ ยกวา่ 14 วนั

Test Procedures for Sterility Test USP40

: Direct Inoculation

ใช้ทดสอบ sterility test สาํ หรบั ตวั อยา่ งต่อไปนี้

 Nonfilterable liquids

 Oily liquids/ointment and creams (Ointments
and oils and nonfilterable liquids insoluble in
isopropyl myristate)

 Catgut and surgical sutures for vet use

 Solids

 Purified cotton ,surgical dressings, sutures,
and related articles

 Sterile devices

Sterility Test USP40: Direct Inoculation (Non-
filterable liquid samples)

Non-filterable
liquid samples

FTG SCDM

30-35 °C 20-25 °C

Incubate ตาม condition ท่ีกาํ หนดไม่นอ้ ยกวา่ 14 วนั

Sterility Test USP40 : Direct Inoculation

(Sterile Device)

Sterile Device

FTG SCDM

30-35 °C 20-25 °C

Incubate ตาม condition ท่ีกาํ หนดไม่นอ้ ยกวา่ 14 วนั

หมายเหตุ media ทใี่ ช้จะมากกว่ากรณขี อง
non-filterable liquid แต่ไม่เกนิ 2000 ml

INTERPRETATION OF STERILITY
TEST RESULTS

Clean Rooms or Clean Zones / Isolators

1. ถ้าไมม่ เี ชื้อขึ้นถอื ว่า “passed”
2. ถ้ามเี ชื้อขึ้นและตรวจสอบยืนยนั โดยกล้องจลุ ทรรศน์
แล้ว
2.1 sample ไม่ผา่ นการทดสอบ

2.2 ถ้าสงสยั ว่าวิธีการทดสอบไม่ถกู ต้อง (invalid) โดยไม่
เก่ียวขอ้ งกบั ตวั อย่างที่ทดสอบ ในข้อใดขอ้ หน่ึงข้างล่าง สามารถทาํ
การทดสอบซาํ้ ได้โดยใช้ตวั อยา่ งเท่ากบั การทดสอบครงั้ แรก

ก. Data of the microbiological monitoring of the
sterility testing facility show a fault

ข. A review of the testing procedure used during
the test in question reveals a fault

ค. Microbial growth is found in the negative
controls

ง. Identify the microorganisms isolated from the
test and the growth of this species may be ascribed
to faults with respect to the material or the
technique used in conducting the sterility test
procedure

INTEPRETATION OF STERILITY TEST
RESULTS

3. การทดสอบซาํ้ หากผลการทดสอบไม่ถกู ต้องจาก 2.2
ให้ทาํ ซาํ้ โดยใช้จาํ นวนตวั อย่างเท่ากับการทดสอบครัง้ แรก

3.1 ถ้าเชื้อไม่ขึน้ ถือว่า “passed”
3.2 ถ้ามีเชื้อขึ้นและตรวจสอบยืนยนั โดยกล้องจลุ ทรรศน์
แล้ว สรปุ ว่า sample ไม่ผา่ นการทดสอบ