particulatematterandsterilitytestcolor

Table 1 Minimum Quantities to be used for each

medium (USP40) & Minimum volume used (USP24)

USP40 Minimum volume, in ml, of each
medium (USP40)

Container Minimum volume Used for direct Used for membrane or
content taken from each inoculation to half membrane
(ml) container for each volume taken representing total volume
medium from each from the appropriate
container (ml) number of containers (ml)
< 1 ml The whole contents
of each container volume USP24
100
of
Half the contents
1-40 ml of each container sample 100

>40 ml to but NLT 1 ml NMT 100
NMT 100 ml 10% 100
> 100 ml 20 ml volume

10% of the of media
contents of the
container but not
less than 20 ml

Sterility Test USP40 Method II: Direct Inoculation
(Non-filterable liquid samples)

1 ml 1 ml Non-filterable
liquid samples

FTG SCDM

30-35 C 20-25 C

15 ml 15 ml

Incubate ตาม condition ที่กาหนดไม่นอ้ ยกวา่ 14 วนั

Sterility Test USP34 Method I: Membrane
Filtration Method (Liquid samples)

n …2 EntireContent

Rinse ด้วย 1
 100 ml 0.45 
diluting and
rinsing fluid

FTG sample SCDM
30-35 C 100 ml 20-25 C
ไมน่ อ้ ยกวา่ 14 วนั ไม่นอ้ ยกวา่ 14 วนั

100 ml

Method Suitability Test

(Validation Tests for

Bacteriostasis and Fungistasis )

◼ กอ่ นกำรทดสอบ sterility test ตอ้ งแน่ใจวำ่ bacteriostatic และ
fungistatic activity ทม่ี ใี น sample ไม่รบกวนผลกำรทดสอบ

◼ ทำเม่อื
◆ เป็นกำรทดสอบตวั อย่ำงใหม่
◆ มกี ำรเปลย่ี นแปลงสภำวะกำรทดสอบ

◼ มี 2 วธิ ี ตำมวธิ กี ำรทดสอบ sterility test

◼ Membrane filtration

◼ Direct Inoculation

Method Suitability Test : Membrane filtration

test

（Sample）

กรองผา่ นเยอื่ กรอง 0.45 m

3 21

Rinse ด้วย

100 ml Inoculated 3rd rinse
diluting and Inoculated 3rd rinse
sample
rinsing fluid

Positive Incubate
ไมเ่ กินกวา่ 5 วนั
control
(ไมก่ รอง sample)

Method Suitability Test : Membrane

filtration test

◼ หาก sample มี bact & fungistatic activity
◆ dilute จนไม่มี activity โดย diluting and
rinsing fluid (fluid A, fluid D, fluid K)
◆ เปลย่ี น membrane filter
◆ ใช้ neutralizing agent
◆ กรณที ใ่ี ช้ rinsing fluid 100 ml ล้างจานวน 5 คร้ัง
แล้วยงั กาจัด bact & fungistatic activity ของ
sample ไม่ได้ ใหท้ ดสอบ sterility test ไดเ้ ลย

Selected Antibacterial Substances and Their
Inactivation for Sterility Testing

Substance Method of Inactivation

Phenol Dilution 1: 50
Alcohol
Dilution 1:50
MP, PP Inactivation with 10% Tween 20
Inactivation with 5% Tween 20/80 or 0.5%
Benzalkonium Tween 80 with 0.07 % lecithin
chloride Inactivation with 3% Tween 80 with 0.5 %
Penicillin lecithin
Barbiturates
Polymyxin B sulfate Incubation with highly active penicillinase
Dilution to less than 0.2 %
Inactivation with 0.5 % lecithin with 4%
glycerin in nutrient broth

Sterile Diluting and Rinsing Fluid for
Membrane Filtration

◼ Fluid A peptic digest of animal tissue in water
“main diluting fluid”

◼ Fluid A for penicillins and cephalosporins
Aseptically add to Fluid A, sterile -lactamase.

◼ Fluid D Fluid A + polysorbate 80
Use this fluid for articles containing lecithin or oil, or

for devices labeled as “sterile pathway ”.
◼ Fluid K peptic digest of animal tissue + beef extract

+ polysorbate 80 in water
Use this fluid for articles containing petrolatum and for

rinsing pathways of devices

Method Suitability Test: Direct Inoculation

Positive sample
control

Inoculated medium

Incubate ตาม condition ที่กาหนดไม่เกิน 5 วนั

หมายเหตุ ทาซ้าเชื้อต่างชนิด, ทาซ้า media ต่างชนิด

Method Suitability Test: Direct Inoculation

◼ ถา้ sample มีฤทธ์ิ bacterio & fungistasis
◆ ให้กาจดั activity โดยใช้ sterile neutralizing agent เช่น
polysorbate 80, lecithin, azolecthin หรอื -
lactamase
◆ ถ้า neutralizing agent ไมไ่ ดผ้ ลใหใ้ ช้วิธีเพิ่มปริมาตรของ
medium (dilution) โดยให้ใช้ปริมาตรของ medium น้อยท่ีสุด
ท่ีทาให้เชื้อสามารถเจริญไดเ้ มอ่ื มี sample
◆ ถ้าใช้ medium จนถึง 2000 ml sample ยงั มีactivity ให้ใช้
medium 2000 ml ในการทดสอบ sterility test ยกเวน้ กรณีที่
ทดสอบ อปุ กรณ์ทางการแพทยส์ ามารถใช้ medium มากกวา่
2000ml ได้ หรอื อาจใช้ conc medium โดยเตมิ โดยตรงในผลติ ภัณฑ์

◼ ถ้าตวั อย่างไมม่ ี activity กใ็ ช้ตวั อยา่ ง และ medium เหมือนตาราง

Test Procedures for Sterility Test USP40

Method I: Membrane Filtration Method

❑นิยมใช้วิธีนี้สาหรบั product ที่เหมาะกบั การกรอง
❑เหมาะกบั ตวั อย่างพวก liquids, soluble powder

ท่ีมีคณุ สมบตั ิพวกbacteriostatic& fungistatic
❑เหมาะกบั ตวั อย่างพวก oil, ointment, cream ท่ี

dilute เป็น solution ได้ด้วย non-
bacteriostaticและ non-fungistatic diluting

fluid
❑เหมาะกบั การทา sterility test ของ surface หรือ

critical pathways ของเคร่ืองมือต่าง ๆ

Test Procedures for Sterility Test USP40

Method I: Membrane Filtration Method

ตวั อยา่ งที่ทดสอบ

1. Aqueous solutions
2. Soluble solid
3. Oil and oily solutionsK
4. Ointments and CreamsK
5. Prefilled syringes
6. Solids for Injection other than antibiotics
7. Antibiotic solids for injection
8. Antibiotic solids, bulks and blends
9. Sterile aerosol productsD
10. Devices with pathways labeled sterileD

Sterility Test USP40 Method I: Membrane
Filtration Method (aqueous solutions)

n …2 1

Rinse ด้วย
 100 ml
diluting and
rinsing fluid

FTG sample SCDM
30-35 C 20-25 C
ไมน่ อ้ ยกวา่ 14 วนั ไมน่ อ้ ยกวา่ 14 วนั

Test Procedures for Sterility Test USP40

: Direct Inoculation

ใช้ทดสอบ sterility test สาหรบั ตวั อยา่ งต่อไปนี้

❑ Nonfilterable liquids

❑ Oily liquids/ointment and creams (Ointments
and oils and nonfilterable liquids insoluble in
isopropyl myristate)

❑ Catgut and surgical sutures for vet use

❑ Solids

❑ Purified cotton ,surgical dressings, sutures,
and related articles

❑ Sterile devices

Sterility Test USP40: Direct Inoculation (Non-
filterable liquid samples)

Non-filterable
liquid samples

FTG SCDM

30-35 C 20-25 C

Incubate ตาม condition ท่ีกาหนดไม่นอ้ ยกวา่ 14 วนั

Sterility Test USP40 : Direct Inoculation

(Sterile Device)

Sterile Device

FTG SCDM

30-35 C 20-25 C

Incubate ตาม condition ที่กาหนดไมน่ อ้ ยกวา่ 14 วนั

หมายเหตุ media ทใี่ ช้จะมากกว่ากรณขี อง
non-filterable liquid แต่ไม่เกนิ 2000 ml

INTERPRETATION OF STERILITY

TEST RESULTS

Clean Rooms or Clean Zones / Isolators

1. ถ้าไมม่ ีเชื้อขึ้นถือว่า “passed”
2. ถ้ามีเชื้อขึน้ และตรวจสอบยืนยนั โดยกล้องจลุ ทรรศน์
แล้ว
2.1 sample ไมผ่ า่ นการทดสอบ

2.2 ถ้าสงสยั ว่าวิธีการทดสอบไม่ถกู ต้อง (invalid) โดยไม่
เก่ียวขอ้ งกบั ตวั อย่างที่ทดสอบ ในขอ้ ใดขอ้ หนึ่งขา้ งล่าง สามารถทา
การทดสอบซา้ ได้โดยใช้ตวั อย่างเท่ากบั การทดสอบครงั้ แรก

ก. Data of the microbiological monitoring of the sterility
testing facility show a fault

ข. A review of the testing procedure used during the test
in question reveals a fault

ค. Microbial growth is found in the negative controls

ง. Identify the microorganisms isolated from the test and
the growth of this species may be ascribed to faults with
respect to the material or the technique used in conducting
the sterility test procedure

INTEPRETATION OF STERILITY TEST
RESULTS

3. การทดสอบซา้ หากผลการทดสอบไม่ถูกต้องจาก 2.2
ให้ทาซา้ โดยใช้จานวนตัวอย่างเท่ากับการทดสอบคร้ังแรก

3.1 ถา้ เชื้อไม่ขึน้ ถอื ว่า “passed”
3.2 ถา้ มีเชื้อขึ้นและตรวจสอบยืนยนั โดยกล้องจลุ ทรรศน์
แล้ว สรปุ ว่า sample ไมผ่ า่ นการทดสอบ