LC MS

คู่มอื การใช้งานและบารุงรักษา เครื่อง LC-MS/MS

Exion LCTM Series
Mass spectrometer 4500 Series

จัดทำโดย
นำงสำวกอรีอะ บิลหลี
ตำแหน่ง นักวิทยำศำสตร์ปฏบิ ตั กิ ำร
กลุ่มงำนวจิ ัยระบบตรวจสอบคุณภำพดินและนำ กลุ่มวจิ ยั เกษตรเคมี
กองวิจยั พัฒนำปจั จยั กำรผลิตทำงกำรเกษตร กรมวชิ ำกำรเกษตร

2564

สารบญั

เรื่อง หนำ้
1. หลกั กำรของเครื่อง LC-MS/MS...............................................................................................................1
2. สว่ นประกอบของเครื่อง LC-MS/MS .......................................................................................................1
3. กำรใชง้ ำนเคร่ือง LC-MS/MS ...................................................................................... 3
4. กำรสรำ้ ง Method เพ่ือทำกำรตรวจวิเครำะห์ ................................................................... 4
5. กำรตงั Batch เพือ่ สง่ั Run ......................................................................................................................4
6. กำรส่ัง Run..............................................................................................................................................5
7. กำรดูผลข้อมลู ..........................................................................................................................................6
8. กำรบำรงุ รักษำเครื่อง LC-MS/MS ...........................................................................................................6



~1~

1. หลกั การของเคร่ือง LC-MS/MS
Liquid Chromatography (LC) เป็นเทคนิคหน่ึงของกำรแยกสำร โดยจะใช้สำรละลำย

เคล่ือนที่ (Mobile phase) นำพำสำรละลำยตวั อย่ำงไหลผำ่ นสำรละลำยอย่กู ับที่ (Stationary phase) ท่ี
เป็นอนุภำคขนำดเล็กท่ีบรรจุอัดแน่นในท่อ Stainless ซ่ึงเรียกว่ำ คอลัมน์ (Column) ซึ่งกระบวนกำร
แยกสำรจะเกิดขึนภำยในคอลัมน์ หลังจำกนันสำรที่ถูกแยกจะไหลผ่ำนเข้ำสู่เคร่ืองตรวจวัดมวล (Mass
spectrometer : MS) โดยกระบวนกำรไหลของ Mobile phase จะถูกควบคุมด้วยปั๊ม (Pump) เคร่ือง
ตรวจวัดมวลจะทำหน้ำท่ีในกำรตรวจวัดนำหนกั (Mass) โดย Mass ที่ตรวจวัดได้จะแสดงถึงชนิดของสำร
ท่ีสนใจ (Analyte) ท่ีต้องกำรตรวจวิเครำะห์ โดยผลกำรตรวจวิเครำะห์จะมีควำมแม่นยำสูง เน่ืองจำกมี
กำรใช้ Mass spectrometer สองเคร่ืองในกำรยนื ยนั ผลท่ไี ด้
2. ส่วนประกอบของเคร่ือง LC-MS/MS
2.1.เคร่ือง LC-MS/MS ประกอบดว้ ย 3 สว่ นหลกั ๆ คอื

2.1.1. สว่ น LC ทำหน้ำทีแ่ ยกองคป์ ระกอบสำรที่สนใจออกจำกสำรตัวอย่ำง
2.1.2. สว่ น MS (Detector) ทำหน้ำท่ตี รวจวเิ ครำะหม์ วลสำรทส่ี นใจท่ีได้ผำ่ นกระบวนกำรแยกแล้ว
2.1.3. สว่ นเครื่องบนั ทึกและประมวลผล (Computer) ทำหนำ้ ท่ีเก็บข้อมูล รวมทังทำผลของสำรทไ่ี ด้

จำกกำรตรวจวเิ ครำะห์
2.2.สว่ นประกอบและรำยละเอยี ดของเคร่อื ง LC

2.2.1. Mobile phase ทำหนำ้ ทน่ี ำพำสำรตัวอย่ำงเข้ำสู่ระบบซง่ึ ก่อนนำมำใช้จะต้องกรองกอ่ น
2.2.2. Degasser ทำหนำ้ ท่ีกำจดั ฟองอำกำศต่ำงๆไม่ให้เคลื่อนเข้ำสู่คอลัมน์
2.2.3. Pump ทำหน้ำที่นำพำ Mobile phase เขำ้ สรู่ ะบบ ด้วยอัตรำไหล (Flow rate) ท่ีกำหนดไว้

อย่ำงแมน่ ยำ
2.2.4. Injector หรือ Autosampler ทำหน้ำท่ีฉดี สำรตวั อย่ำงเขำ้ สู่ระบบ ซึ่ง Injector จะใช้เป็นแบบ

Auto Injector
2.2.5. Guard column (Option) ทำหน้ำที่กรอง particle ตำ่ งๆ โดยวัสดุภำยในจะเป็นประเภท

เดยี วกันกบั คอลมั น์ที่ใช้แยก แต่จะมีอนุภำคใหญก่ วำ่ หรอื เท่ำกับคอลัมน์
2.2.6. Column ทำหน้ำทีแ่ ยกสำรท่ีสนใจออกจำกสำรตวั อยำ่ ง โดยภำยในคอลัมน์จะมี Stationary

phase เพื่อทำใหเ้ กิดกำรแยกขึน
2.2.7. Detector ทำหนำ้ ทใ่ี นกำรตรวจวดั สำรที่สนใจ โดยเครือ่ งตรวจวัดมีหลำยรปู แบบ เช่น UV-

Visible, Fluorescence, Mass spectrometer เป็นตน้
2.3.สว่ นประกอบและรำยละเอยี ดของเครื่อง MS

2.3.1. Ion source เป็นแหลง่ กำเนดิ พลังงำนท่ีทำให้สำรทสี่ นใจเกิดกำรแตกตัวกลำยเป็นไอออน
โดยท่วั ไปจะใชก้ ันหลักๆ อยู่ 2 โหมด คอื
1) Electrospray Ionization (ESI) : สำรตัวอยำ่ งจะอยู่ในสถำนะของ ของเหลวที่
มีประจุเนื่องจำกสำรตัวอย่ำงจะถูกให้ศักย์ไฟฟ้ำที่สูงก่อนออกจำก Probe ซึ่ง

~1~

~2~

เม่ือ Mobile phase ระเหยด้วยแก๊สร้อนจะทำให้ประจุอยู่ชิดกันมำกขึนและ
เกิดกำรแตกตัวในที่สุด ซึ่งสำรตัวอย่ำงที่เหมำะสมกับกำรใช้โหมดนี คือ สำรท่ีมี
ขัว
2) Atmosphere pressure chemical ionization (APCI) : สำรตวั อยำ่ งจะอย่ใู น
สถำนะแก๊สท่ีมีประจุ เนื่องจำกสำรตัวอย่ำงจะถูกให้ควำมร้อนก่อนออกจำก
Probe และถูกทำให้มีประจุมำจำก Mobile phase ซ่ึง Mobile phase จะถูก
ทำให้เป็นประจุเม่ือสัมผัสกับ Corona discharge ดังนันกำรใช้โหมดนีจึง
สำมำรถใชอ้ ัตรำกำรไหลของ Mobile phase ท่ีสงู ได้ เนอ่ื งจำกกำร Ionization
ของสำรตัวอยำ่ งตอ้ งอำศัยกำรส่งผ่ำนประจุจำก Mobile phase นั่นเอง ดังนัน
สำรตวั อยำ่ งที่เหมำะสมกบั กำรใชโ้ หมดนี คือ สำรทไ่ี ม่มีขวั ถงึ มีขวั เลก็ น้อย
2.3.2. Mass analyzer ทำหน้ำท่ีตรวจวิเครำะห์มวล ซ่ึงสำหรับเคร่ือง LC-MS/MS จะมีส่วนของ
เคร่ืองวิเครำะห์มวลทังหมด 2 เคร่ือง ซ่ึงจะเรียกว่ำ MS1 ว่ำ “Q1” และ MS2 ว่ำ “Q3” ซ่ึง
ระหว่ำง MS1 และ MS2 จะมตี ัวเช่ือมทีเ่ รียกวำ่ Collision ซงึ่ ทำหน้ำทที่ ำใหม้ วลทีเ่ ข้ำจำก Q1
แตกตัวอีกครังเพื่อเข้ำสู่ Q3 โดยมวลที่ได้จำกทัง Q1 และ Q3 จะเป็นตัวอ้ำงอิงซึ่งกันและกัน
เน่ืองจำกมวลท่ีเข้ำสู่ Q1 จะเป็นมวลไอออนของสำรที่สนใจหรือเรียกว่ำ “ตัวแม่” และเมื่อตัว
แม่ถูกทำให้แตกตัวอีกครังได้เป็นมวลที่เล็กลงหรือเรียกว่ำ “ตัวลูก” ซ่ึงตัวลูกจะถูกผลักเข้ำสู่
Q3 ต่อไป ดังนันจะเห็นว่ำมวลทังสองมีควำมสัมพันธ์กัน จึงอำศัยหลักกำรนีในกำรยืนยันผลที่
ได้
2.3.3. Mass detector ทำหน้ำที่ตรวจวัดมวลท่ีออกมำจำกเคร่ืองวิเครำะห์มวลโดยนับเป็นมวลต่อ
ประจุ
เคร่ืองวิเครำะห์มวลมีหลำยประเภท เช่น Quadrupole, Ion Trap, Time of Fight และ Magnetic
Sector เป็นต้น ซึ่งในห้องปฏิบัติกำรนีใชเ้ คร่ืองวิเครำะห์มวลประเภท Quadrupole ทัง Q1 และ Q3 สำหรับ
เครื่อง API 3200 และใช้ Quadrupole และ Ion Trap สำหรับ Q1 และ Q3 สำหรบั เครื่อง QTRAP 5500
หลักการของ Quadrupole
Quadrupole จะประกอบด้วยแท่งโลหะ 4 แท่งซึง่ จะมีกำรให้ศักย์ไฟฟ้ำ DC และ RF สลับกนั ในแต่ละ
คู่ของแทง่ ท่ีอยู่ตรงข้ำมกัน ซ่ึงมวลท่ีไม่ได้มีค่ำศักย์ไฟฟ้ำท่ีอย่ใู นช่วงที่ตังไว้ก็จะไม่สำมำรถผ่ำนเข้ำไปได้ ทำให้มี
แต่มวลท่สี นใจเท่ำนนั ทีส่ ำมำรถผ่ำนเขำ้ ไป
หลักการของ Ion Trap
Ion Trap จะคล้ำยกับ Quadrupole เพียงแต่ Ion ที่เคลื่อนท่ีผ่ำนมำจะถูกกักเก็บอยู่ภำยในช่องว่ำง
End cap และ Ring electrode ก่อนท่ีจะเคล่ือนเข้ำสู่เครื่องตรวจวัด เป็นผลทำให้ได้รับสัญญำณท่ีสูงขึนกว่ำ
กำรใช้ Quadrupole

~2~

~3~

3. การใชง้ านเคร่ือง LC-MS/MS
3.1. กำรเปิด – ปิดเคร่ือง LC
3.1.1.กำรเปิดเครื่อง LC
3.1.1.1. เปดิ เครอื่ งคอมพวิ เตอร์ รอจนกระทง่ั เครื่องคอมพวิ เตอร์พร้อมใชง้ ำน
3.1.1.2. เปิดสวิตซ์ตัวเคร่ือง LC ท่ีอยู่ด้ำนล่ำงซ้ำยมือ ทุกๆ Module ได้แก่ Pump, Auto
sampler, Column Oven และ Controller
3.1.1.3. รอจนเคร่ือง LC พร้อมใช้งำน
3.1.2.กำรปิดเคร่ือง LC
3.1.2.1. Deactivated เคร่ือง LC (กรณีทเ่ี ครอื่ งเช่ือมต่อกบั MS)
3.1.2.2. ปิด Module ของเครอื่ ง LC ทกุ Module
3.2. กำรเปิด – ปดิ เครือ่ ง MS
3.2.1.กำรเปดิ เคร่ือง MS
3.2.1.1. เปดิ เครื่อง Nitrogen generator
3.2.1.2. ถอด Ion source และ Curtain plate ออก
3.2.1.3. เปิดสวติ ซ์เครอ่ื ง MS
3.2.1.4. ใช้มือกดตรงตำแหน่ง Orifice จำกนันนำ Septa มำปิดรูตรง Orifice และนำกระดำษ
Kimwipe มำปดิ ท่ีชอ่ งดำ้ นลำ่ งเพื่อปอ้ งกนั ไม่ให้ Septa รว่ งลงไปใน MS
3.2.1.5. เขำ้ Analyst software จำกนนั Activated MS
3.2.1.6. ทำกำรดูค่ำ Vacuum ซึ่งถ้ำค่ำน้อยกว่ำ 2.0 torr (x10-5) แสดงว่ำ MS เร่ิมเข้ำสู่โหมด
ปกตสิ ำมำรถเอำ Septa ออกได้ ซึ่งค่ำ Vacuum ปกตจิ ะอยู่ประมำณไมเ่ กิน 0.8 (x10-5)
3.2.2.กำรปิดเครือ่ ง MS
3.2.2.1. Deactivated เครอื่ ง MS
3.2.2.2. กดปมุ่ Vent ทข่ี ำ้ งเครื่อง MS ซง่ึ Roughing pump จะค่อยๆหยุดเอง
3.2.2.3. รอประมำณ 15 นำที จำกนนั ปิดสวิตซเ์ ครื่อง MS
3.3. กำรเชื่อมตอ่ LC กับ MS/MS
3.3.1.เข้ำโปรแกรม Analyst software จำกนันใส่ Password
3.3.2.เลอื ก Hardware Configuration จำกนนั เลอื ก Activated ตำมกำรใชง้ ำน
3.3.3.เม่ือเครื่องทำกำรเช่ือมต่อกันแล้ว จะปรำกฏเป็นเครื่องหมำยถูก () สีเขียว พร้อมทังแสดง
สภำวะในแต่ละส่วนของเครื่องว่ำอยู่ในโหมด Standby ซ่ึงจะปรำกฏเป็นสีเหลืองตรงแถบล่ำง
ด้ำนขวำของหน้ำต่ำง Hardware Configuration Editor เม่ือต้องกำรยกเลิกกำรเชื่อมต่อ
ระหวำ่ งLC และ MS ใหท้ ำกำร Deactivate Profile แทน

~3~

~4~

4. การสร้าง Method เพ่อื ทาการตรวจวิเคราะห์
Analyst Software
4.1. กำรสรำ้ ง Method
4.1.1.เข้ำโปรแกรม Analyst software จำกนนั ใส่ Password
4.1.2.เลอื กช่อื Project ของรำยกำรทดสอบทตี่ อ้ งกำรตรวจวิเครำะห์
4.1.3.ทำกำร Configuration LC เขำ้ กบั MS โดยเลือกท่ี Hardware Configuration
4.1.4.เลอื ก Build Acquisition Method และทำกำรกรอกคำ่ ขอ้ มูลที่ไดจ้ ำกกำร Optimization ของ
รำยกำรทดสอบนันทังในส่วนของ Source และ Compound ลงในช่องท่ีกำหนด ถ้ำช่องไม่
เพยี งพอสำมำรถคลิกขวำและเพมิ่ ช่องได้
4.1.5.ทำกำรกรอกขอ้ มลู ทไ่ี ดจ้ ำกกำร Optimization ในส่วนของ LC และ MS
- สว่ นของ LC
1) นำเมำส์มำคลิกที่ Sciex LC System จำกนันใส่ข้อมูลลงในตำรำง ได้แก่ Total time,
Flow rate, %A และ %B
2) Click ตรง Binary gradient เพอื่ Set ระบบปั๊มสำร
3) นำเมำส์มำคลิกท่ี Autosampler จำกนันทำกำรตังค่ำ Autosampler
- Injection volume : ระบุปรมิ ำตรของสำรตวั อย่ำงท่จี ะฉดี เขำ้ สรู่ ะบบ
- Needle stroke : ควำมลกึ ของเข็ม
- Temperature control : อุณหภมู ิทใี่ ชใ้ นกำรควบคุม Autosampler
- Wash detail : กำรล้ำงเขม็ ทังแบบภำยในและภำยนอก
4) นำเมำสม์ ำคลกิ ที่ Column Oven จำกนนั ทำกำรตังค่ำอุณหภูมขิ อง Column
- สว่ นของ MS
1. นำเมำส์มำคลิกท่ี Mass Spec จำกนันทำกำรใส่ค่ำท่ีได้จำกกำร Optimization ลงใน
ตำรำง ได้แก่ Q1 Mass, Q3 Mass, Time ID, DP, EP, CE, CXP, Scan type และ
Polarity
2. ทำกำรใส่เวลำที่ Duration โดยเวลำที่ทำกำรตังค่ำใน Duration ของ MS จะต้อง
สัมพนั ธ์กับเวลำใน LC (run time)

5. การตง้ั Batch เพื่อสง่ั Run
5.1. เขำ้ โปรแกรม Analyst software จำกนนั ใส่ Password
5.2. เลอื กชื่อ Project ของรำยกำรที่ต้องกำรทดสอบ ซ่ึงผลท่ีไดจ้ ำกกำรทดสอบทังหมดจะถูกนำมำเก็บไว้
ในช่อื Project นี
5.3. ทำกำร Configuration LC เขำ้ กับ MS โดยเลอื กท่ี Hardware Configuration
5.4. เลอื ก Build Acquisition Batch

~4~

~5~

5.5. ทำกำรตังชื่อท่ีตำแหนง่ Set โดยชอ่ื ท่ีตงั นีจะเป็นโฟลเดอร์รองท่จี ะอยู่ในโฟลเดอร์หลกั โดยโฟลเดอร์
หลกั จะปรำกฏอยใู่ น Project ของรำยกำรทดสอบนนั

5.6. ทำกำรเลือก Method ทจี่ ะใชใ้ นรำยกำรทดสอบนนั
5.7. เลือก Add และ Add Sample ซึ่งกำรตังช่ือให้ตังเป็นรูปแบบเดียวกัน คือ “ปี ค.ศ. 2 ตัวเดือนวัน”

ของวันทท่ี ำกำรทดสอบ
5.8. ทำกำรใส่จำนวนตัวอย่ำงท่ีต้องกำร Run จำกนันใส่รำยละเอียดต่ำงๆใน Sequence Table เฉพำะ

ส่วนทส่ี ำคญั ดงั นี

 Sample name : ช่ือของตวั อย่ำงโดยใหใ้ สข่ อ้ มลู เป็นรูปแบบเดยี วกนั
- สำหรับ Calibration curve : “ชอ่ื ย่อ Test_ควำมเขม้ ขน้ ”
- สำหรบั Control : “ช่อื ยอ่ Test_Control_level”
- สำหรับลูกค้ำ : “หมำยเลขสิง่ สง่ ตรวจ_Lab no._ชอื่ -สกลุ ”

 Plate code : ย่ีหอ้ หรอื ชนดิ ของ Plate ที่ใช้ ซงึ่ สำหรบั หอ้ งปฏิบัติกำรนีจะใช้อยู่ 2 แบบ คอื
54 vial และ 96-well plate ซึ่งเมื่อใช้งำนจะเลือกเป็น 54 Vialplate และ 96Greiner
ตำมลำดบั

 Plate position : ตำแหน่งท่ีวำง Plate ซ่ึงจะมี 2 ตำแหน่ง คือตำแหน่งด้ำนนอกและด้ำน
ใน โดยกำหนดหมำยเลขเปน็ 1 และ 2 ตำมลำดับ

 Vial number : ตำแหนง่ ที่วำง Vial

 Date File : ชือ่ ไฟล์ท่ีตงั ใน Set (ปรำกฏอัตโนมัติ)

 Inj. Volume : ปริมำณสำรตวั อยำ่ งท่ฉี ดี (ปรำกฏอัตโนมตั ติ ำม Method ที่เลือก)
5.9. เม่ือตังค่ำเสร็จสินแล้ว ให้คลิกเลือกที่ Submit จำกนันตรวจทำนข้อมูลอีกครัง เม่ือไม่ต้องกำรแก้ไข

ข้อมูลใดๆ อีกให้กด Submit แต่ถ้ำต้องกำรแก้ไขข้อมูลให้กลับไปยังหน้ำ Sample อีกครังก่อนเพ่ือ
ทำกำรแก้ไข
5.10. เมอ่ื ต้องกำรดู Sequence ท่สี ั่งตงั Run ใหไ้ ปทห่ี นำ้ View คลิกที่ Sample Queue
6. การสั่ง Run
6.1. ทำกำรเขำ้ มำท่ีหน้ำจอ Queue Manager หรือ Sample Queue
6.2. คลิกที่ Acquire เลอื ก Equilibrate จำกนนั ใสเ่ วลำที่ต้องกำรใหเ้ คร่ือง Equilibrate กอ่ นทำกำร Run
6.3. เม่ือเคร่ืองพร้อม Run จะปรำกฏ Status สีเขียวด้ำนล่ำงที่เป็นไอคอนของแต่ละ Module ของ Lc-
MS/MS จำกนันคลกิ ท่ี Acquire เลือก Start Sample
6.4. กรณที ่ีต้องกำรเพม่ิ ตวั อยำ่ งเขำ้ ไปใน Sequence สำมำรถทำได้โดยกำรตงั Sequence เพ่มิ เข้ำไป
6.5. กรณีท่ีต้องกำรแทรกตัวอย่ำงจะต้องลบตัวอย่ำงก่อนหน้ำนันออกจำกหน้ำ View Queue จำกนันจึง
Submit ตัวอยำ่ งท่ีตอ้ งกำรเขำ้ ไป และตำมดว้ ยตวั อย่ำงกอ่ นหน้ำนีที่ลบไป
6.6. กรณที ีต่ ้องกำรหยดุ Sequence ให้คลกิ ที่ Acquire เลอื ก Stop Queue

~5~

~6~

7. การดูผลขอ้ มลู
7.1. เขำ้ โปรแกรม Analyst software
7.2. เม่ือต้องกำรดูสัญญำณของสำรขณะที่ Run อยู่หรือ Run เสร็จไปแล้ว ให้คลิกเลือกที่ Open Data
File จำกนันดับเบิลคลิกเลือกโฟลเดอร์ของวันที่ต้องกำร และเลือกไฟล์ท่ีต้องกำรออกมำ ซึ่งผล
Chromatogram ที่ไดจ้ ะปรำกฏเป็น Chromatogram รวมของสำรทกุ ตัว
7.3. หำกต้องกำรดูผล Chromatogram ของแต่ละสำร ให้ทำกำรคลิกขวำท่ี Chromatogram เลือก
Extract Ions จำกนนั เลอื กสำรทต่ี ้องกำรดูผล ซ่ึงจะปรำกฏ Chromatogram เพม่ิ ขึนมำก
7.4. หำกต้องกำรดูค่ำ Intensity หรือ Peak area ของสำรให้ทำกำรคลิกขวำที่ Chromatogram เลือก
List
7.5. เมอ่ื ตอ้ งกำรดู Mass spectrum ให้ ดบั เบลิ คลิกท่ี Peak ของสำรท่สี นใจ
7.6. กรณีท่ีต้องกำรนำ Peak มำซ้อนทับกัน (Overlay) ให้ทำกำรเปิดไฟล์ของ Peak ที่ต้องกำรมำ
Overlay กัน จำกนันคลิกที่หน้ำต่ำงของ Peak ที่ต้องกำรให้อีก Peak มำซ้อนทับ ซึ่งปรำกฏเป็น
หน่ำงต่ำงสีนำเงิน และไปท่ีเมนู Explore คลิกเลือก Overlay แล้วนำเมำส์มำคลิกยัง Peak ที่
ตอ้ งกำรให้ไปซอ้ นทับยัง Peak ทเี่ ลือกไว้

8. การบารุงรักษาเครือ่ ง LC-MS/MS
8.1. Check status of MS (Ready)
ทำกำรตรวจดูสีไฟบนเครื่อง MS สำหรับรุ่น API 3200 จะขึนสีเหลืองอมเขียว ขณะท่ีรุ่น QTRAP
5500 จะขนึ ไฟสีเขยี วเมื่อเครอ่ื งพร้อมทำงำน
8.2. Check pressure of nitrogen generator
ทำกำรตรวจสอบที่หน้ำปัดของ Curtain, Source และ Exhaust โดยเข็มที่บ่งบอกควำมดันจะต้อง
เท่ำกับขีดที่กำหนด นอกจำกนีใหส้ งั เกตทไ่ี ฟของเคร่อื ง ถ้ำมีไฟเขียวอมเหลอื งติดที่ Service หรือไฟสี
แดงที่ Alarm ใหต้ ิดตอ่ ทำงผูข้ ำยทันที เพ่ือให้ผ้ขู ำยสง่ ช่ำงมำดแู ล
8.3. Check/Change DDI water
DDI water ต้องไม่มีสี หรือควำมขุ่นและให้บรรจุในขวดแก้วสีชำ ตรวจสอบปรมิ ำตรของ DDI water
โดยให้มีปริมำตรอย่ำงน้อย 500 มิลลิลิตร ก่อนใช้งำน DDI water มีอำยุ 5 วัน โดยเริ่มนับจำกวันที่
ผลติ จำกเครื่อง เม่อื ผ้ใู ช้งำนพบวำ่ DDI water หมดอำยแุ ลว้ ให้เปล่ียนใหมท่ นั ที
8.4. Check/Change 50:50 MeOH : DDI water
50:50 MeOH : DDI water เตรียมโดยใช้ Methanol ผสมกับ DDI water โดยใช้ปริมำตรอย่ำงละ
เทำ่ ๆกัน ซึง่ ในกำรเตรียม 1 ครงั ควรทำให้ได้ปรมิ ำตรรวมอย่ำงนอ้ ย 500 มลิ ลิลิตร โดยบรรจุในขวด
แก้วใส 50:50 MeOH : DDI water มีอำยุ 1 เดอื น นบั จำกวนั ท่เี ตรยี ม

~6~

~7~
8.5. Prime system before run (เฉพำะวันทม่ี ีกำร Run)

ใช้ DDI water ล้ำงระบบของ Channel ที่ต้องกำรใช้ โดยใช้ Flow rate 2.0 มิลลิลิตรต่อนำที 10
นำที โดยใช้บีกเกอร์ รองรับตรงบริเวณ Column compartment เพ่ือไล่สำรละลำยท่ีอำจหลงเหลือ
อยูใ่ นระบบออกให้หมด
8.6. Clean system after run
ใช้ DDI water ล้ำงระบบโดยล้ำงผ่ำนคอลัมน์ เป็นเวลำประมำณ 30 นำที จำกนันคอ่ ยๆเพ่มิ สัดส่วน
ของ DDI water : Acetonitrile จนมีสัดส่วนเป็น 30 : 70 %v/v ซึ่งระยะเวลำในกำรล้ำงขึนกับ
ขนำดของคอลัมนท์ ี่ใชใ้ นแตล่ ะกำรทดสอบ จำกนันถอดเก็บคอลัมน์

~7~