2021-Toplantı-17-Konuşma-09

Lamotrijin

• Lamotrigine (LMG), hem yeni hem de refrakter epilepsi vakalarında
yaygın olarak kullanılan bir antiepileptik ajandır.

• Zayıf bir baz olan LMG, esas olarak (%60-70), üridin 5’-difosfat (UDP)-
glukronozil transferaz enzimi tarafından, glukronik asit ile
konjugasyonu (glukronidasyon) sonucu idrarla atılır.

• Yaklaşık %18’i diğer metabolitler şeklinde, %10’u da değişmeden
idrarla atılır.

• Yarılanma ömrü yaklaşık 24-35 saat arasındadır

4 Aralık 2021, 51
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

JWH-018

Lamotrigine

4 Aralık 2021, 52
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

Kit prospektüsü interferans maddeleri

LUCIO®-Drug EIA SPICE JWH-018 (Ref.
402700T; C402710-60; nal von minden
GmbH, Moers, Germany)

4 Aralık 2021, 53
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

Sentetik Esrar Metaboliti-K2/1 (SCm/K1) düzeyi ölçümü

• İmmunoassay yöntemi ile Sentetik Esrar Metaboliti-K2/1
(Immun-SCm/K1) düzeyi;

• HEIA yöntemi ile LUCIO®-Drug EIA SPICE JWH-018 (Ref. 402700T;
C402710-60; nal von minden GmbH, Moers, Germany) kiti kullanılarak.

• Olympus AU 400 (Olympus life & Material Science Europe, Hamburg,
Germany) otoanalizörü ile ölçüldü.

• LC/MS-MS yöntemi ile Sentetik Esrar Metaboliti-K2/1 (LC/MS-
SCm/K1) düzeyi ölçümü:

• Örneklere katı faz ekstraksiyon yöntemi (SPE) uygulandı. SPE kartuşlara
(UCT-ZCSTHC206–UCT Clean Screen® tube, BGB Analytic AG,
Switzerlandı.

• Örnekler AB- Sciex 3200 QTRAP (AB Sciex, Singapore) LC-MS/MS
cihazı ile analiz edildi.

• Shiseido Capcellpack C18 MG III ( 3µm*2mm*100mm; Shiseido, Tokyo,
Japan) kolon kullanıldı.

4 Aralık 2021, 54
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

Lamotrijin (LMG) Düzeyi ölçümü:

• Örneklerdeki LMG düzeyleri HPLC yöntemi ile ölçülmüştür.

• Analizde modüler sistem ( including a gradient pump, auto sampler,
column oven, and UV detector) Shimadzu LC20AT HPLC (Shimadzu,
Japan) cihazı kullanılmıştır.

• Ayırım için Shiseido Capcell C18 (5µm*4.6mm*250mm; Shiseido,
Tokyo, Japan) kolonu kullanılmıştır.

• Standart hazırlanması: Lamictal® 100 mg tablet (100mg Lamotrijin /
250mg tb; GlaxoSmithKline, Türkiye). 250 mL mobil faz içinde çözüldü ve
1/8 dilüsyon yapılarak 50 mg/L konsantrasyonda standart hazırlandı.

• Standart: 0 için LMG negatif idrar kullanıldı.

• Kalibrator 0 ve Kalibratör 50 mg/L ile 2 noktalı kalibrasyon grafiği çizildi

ve idrar LMG konsantrasyonları mg/L olarak hesaplandı. 55

4 Aralık 2021,
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

Comparison of demographic characteristics and variables of the study's
case-control group

Control Lamotrigine p value
Group (n: 28) Group (n: 27)

Age (years)* 37.57(±8.24) 42.04 (±10.95) 0.093#

Immune-SCm/K1 (HEIA methods, ng/mL)¥ <3.00 (LOD=3.00) 35.84 (±7.62) <0.001§

LC/MS-SCm/K1 (LC/MS-MS) (ng/mL) Negative (<0.1) Negative(<0.1)

Lamotrigine (HPLC) (mg/L)¥ <0.30 (LOD=0.3) 5.71 (±10.61) <0.001§

Gender (F/M) 0.919Χ

Female, n (%) 10 (35.7) 10 (37.0)

Male, n (%) 18 (64.3) 17 (63.0)

*:values are given as mean(±sd), # :p value for Independent Samples Test.  :p value for Chi-square Test,
¥:values are given as Median(±IQR), §: p value for Mann-Whitney U Test, sd:Std. Deviation, IQR: Interquartile
Range. SCm/K1: Synthetic Cannabinoids -K2/1 (JWH-018)

4 Aralık 2021, 56
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

Vaka Kontrol bulguları

• LMG kullanan hastaların tamamının idrarlarında Immun-SCm/K1
sonucu test LOD (LOD=3 ng/mL) değerinden yüksek çıkmıştır.

• LMG grubu Immun-SCm/K1 sonuçları kit prospektüsüne göre
semikantitatif olarak (Cut off=20 ng/mL) değerlendirilirse;

• sadece 1 hastanın sonucu eşik değerinin altında (=negatif; 11.33 ng/mL) çıkmış
• 26 hastanın sonuçları eşik değerinin üzerinde (=pozitif; >20ng/mL) çıkmıştır
• (Cut off = 20 ng/mL, Sensitivity: 96.3% (95% CI: 81.0-99.9); Specificity: 100%

(95% CI: 87.7-100.0, P<0.001).

4 Aralık 2021, 57
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

• LMG grubunda idrarda LMG düzeyi ile Immun-SCm/K1 sonuçları arasında pozitif
yönlü zayıf korelasyon tespit edilmiştir (r=0.393, p=0.043, Spearman’s korelasyon).

4 Aralık 2021, 58
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

İnterferans Çalışma dizaynı

• Grup 1 Örnekler: Standart insan idrar örneğine LMG stok solüsyonundan farklı
volümlerde eklendi 15 örnek hazırlandı.

• Grup 2 Örnekler: LMG kullanan hasta idrar örneğine standart insan idrar örneği ile
seri dilüsyon yapıldı ve 6 örnek hazırlandı.

• Grup 3 Örnekler: Tarama amaçlı kullanılan idrar Immun-SCm/K1 testi kalibratör ve
kontrol materyallerine, LMG stok solüsyonundan ve LMG kalibratörlerleri
eklenerek 14 adet örnek hazırlandı.

• Grup 4 Örnekler Tarama amaçlı kullanılan idrar Immun-SCm/K1 testi kalibratör ve
kontrol materyallerine, LMG kullanan hasta idrarı örneğinden eşit volümde
eklenerek 6 adet örnek hazırlandı.

4 Aralık 2021, 59
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

İnterferans Çalışma dizaynı

4 Aralık 2021, 60
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

İnterferans çalışmasında;

• Grup 1 ve 2 örneklerde Immun-SCm/K1 değerleri ile LMG kons ve log(LMG
cons.) arasında regresyon formülü oluşturuldu ve grafik çizildi.

• Grup 3.ve 4 örneklerde; %interferans ve Cros-reaks% hesaplandı
• [(İnterferans% = (ölçülen Immun-SCm/K1 kons.- gerçek SCm/K1 kons.) /
gerçek SCm/K1 kons.*100);
• (Cros-reaks% = (ölçülen Immun-SCm/K1 kons.- gerçek SCm/K1 kons.) /
LMG kons.*100)].

• Yine aynı grup örneklerde regresyon ve korelasyon analizleri yapıldı ve ilgili
grafikler çizildi.

4 Aralık 2021, 61
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

Grup 1 Örnekler: Lamotrigine, LC/MS-SCm/K1 and measured Immune-SCm/K1
levels of Group 1 samples. (LMG stok+ sağlıklı gönüllü idrarı)

Sample Lamotrigine Immune- LC/MS-SCm/K1
No (mg/L) SCm/K1 (ng/mL)
(ng/mL)

1 8.000 51.73 Neg (<0.1)

2 6.810 36.55 Neg (<0.1)

3 2.300 40.67 Neg (<0.1)

4 2.090 32.76 Neg (<0.1)

5 1.140 29.72 Neg (<0.1)

6 1.120 26.93 Neg (<0.1)

7 1.045 29.88 Neg (<0.1)

8 0.660 26.66 Neg (<0.1) 800
700
9 0.560 18.00 Neg (<0.1) 600

10 0.320 16.29 Neg (<0.1) LMG kons (ng/mL) 500
400
11 0.280 13.69 Neg (<0.1) 300
200
12 0.160 10.87 Neg (<0.1) y = 28,397x - 81,217
R² = 0,9176

13 0.140 7.22 Neg (<0.1) 100

0

14 0.080 6.14 Neg (<0.1) 0 5 10 15 20 25 30

4 Aralık 2021, Measured Imm-SC/K1 (ng/mL)

15 0.070 3.95 NDre.Hgüs(e<y0in.1K)urku, e-posta: [email protected] 62

Grup 2 Örnekler : Lamotrigine, LC/MS-SCm/K1 and measured Immune-
SCm/K1 levels of Group 2 samples.

(LMG kull hasta idrarı +
sağlıklı gönüllü idrarı)

Sa Lamot Immune- LC/MS-
mpl rigine SCm/K1 SCm/K1
(mg/L) (ng/mL) (ng/mL)
e
No Neg (<0.1)

1 0.500 34.70

2 0.250 29.64 Neg (<0.1) 600,00
500,00
3 0.125 22.98 Neg (<0.1) LMG Kons(ng/mL) 400,00
300,00
4 0.063 15.38 Neg (<0.1) 200,00
100,00
5 0.031 10.27 Neg (<0.1) y = 9,3363e0,1139x
0,00 R² = 0,9945
0
6 0.016 5.66 Neg (<0.1) 10 20 30 40

Measured Imm-SCm/K1

4 Aralık 2021, 63
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

Grup 3 Örnekler : Lamotrigine, expected SCm/K1, measured Immune-SCm/K1
levels, and ratio of interference and cross-reactivity in Group 3 samples

Grup 3 Örnekler: No Sample Lamotrigine expected measured Interfe- Cross
idrar Immun- Namea (mg/L) SCm/K1 Immune- rence% reactivity
SCm/K1 QC (ng/mL) SCm/K1
materyallerine, (ng/mL) %*
LMG stok
solüsyonundan ve 1 Cut-off Cal. 0.018 9.57 8.98 -6.17 -3.28
LMG kalib.
eklenerek 14 adet 2 Cut-off Cal. 0.035 9.57 10.80 12.85 3.51
örnek hazırlandı.
3 Cut-off Cal. 0.070 9.57 12.39 29.47 4.03

4 THC Neg. Cal. 0.330 0.00 15.77 #% 4.78

5 Low Cal. 0.330 4.13 17.75 329.80 4.13

6 Control LI 0.330 6.12 20.64 237.30 4.40

7 Cut-off Cal. 0.330 9.57 23.30 143.50 4.16

8 Control LII 0.330 11.39 23.39 105.40 3.64

9 Intermed. Cal. 0.330 17.08 27.89 63.30 3.28

10 High Cal. 0.330 24.85 32.86 32.20 2.43

11 THC Neg. Cal. 14.650 0.00 48.40 #% 0.33

12 Cut-off Cal. 14.650 10.00 50.10 401.00 0.27

13 Control LII 14.650 12.50 50.50 304.00 0.26
4 Aralık 2021, 55.50 #%
64
14 THCDNr.HeügsCeyainl.Kurku, e-post2a:[email protected]
0.19

Grup 4 Örnekler : Lamotrigine, expected SCm/K1, measured
Immune-SCm/K1 levels, and ratio of interference and cross-
reactivity in Group 4 samples

measure

Grup 4 Örnekler Lamotrig expected d Cross
idrar Immun-SCm/K1
testi QC No Sample ine SCm/K1 Immune- Interfe- reactivity
materyallerine, Namea (mg/L) (ng/mL) SCm/K1 rence% %*
LMG kullanan hasta
idrarı örneğinden eşit (ng/mL)
volümde eklenerek 6
adet örnek 1 THC Neg. 0.250 0.00 30.80 #% 12.32
hazırlandı.
Cal.

2 Low Cal. 0.250 4.13 33.65 714.77 11.81

3 Control LI 0.250 6.12 33.28 443.79 10.86

4 Cut-off Cal. 0.250 9.57 34.46 260.08 9.96

5 Control LII 0.250 11.39 35.44 211.15 9.62

6 Intermed. Cal. 0.250 17.08 36.64 114.52 7.82

7 High Cal. 4 Aralık 2002.12, 50 24.85 40.63 63.50 6.31

Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected] 65

• LMG kullanan hasta

İdrarrında LMG
metaboliti varlığı
nedeniyle, daha düşük
LMG kons. Daha fazla
yüksek interferans var
diyebiliriz?

• Metabolitlerler üzerine

ileri çalışmalar
yapılmalıdır.

4 Aralık 2021, 66
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

• LMG kullanan hasta
İdrarrında LMG
metaboliti varlığı
nedeniyle, daha
düşük LMG kons.
Daha yüksek çapraz
reax var diyebiliriz

• Metabolitler üzerine
ileri çalışmalar
yapılmalıdır.

4 Aralık 2021, 67
Dr.Hüseyin Kurku, e-posta: [email protected]

Sabrınız ve ilginiz için…

TEŞEKKÜRLER

Soru ve katkılarınız için [email protected] mail adresinden ulaşabilirsiniz

4 Aralık 2021
Doç.Dr.Hüseyin Kurku,
e-posta:[email protected]